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原文传递益肾壮骨丸中的中药成分检测方法

专利名称：	益肾壮骨丸中的中药成分检测方法
摘要：	本发明公开了中药检测技术领域内的一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，先进行显微镜下观察，初步判定主要药味，再分组进行薄层鉴别作定性判断，然后对莫诺苷与马钱苷进行定量分析，以莫诺苷与马钱苷的总含量作为判断依据；其根据中药成分定性及定量是否符合标准作为判断益肾壮骨丸合格的依据。其有益效果在于：本发明或以多种检测方法进行综合判断，通过一板多测的方式，可以快速判断药物组分的准确性，同时对药物中特定的指标进行定量分析，判断其是否符合设定的指标。其专用于益肾壮骨丸的检测中，本专利中公开的一板多测的思路，也为其他中药成分的检测提供了相应的技术思路。
专利类型：	发明专利
申请人：	扬州市食品药品检验检测中心
发明人：	张璐;田静;尹萌
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911395931.5
公开号：	CN111024877A
代理机构：	南京苏科专利代理有限责任公司
代理人：	董旭东
分类号：	G01N30/90;G01N30/74;G01N30/34;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/90;G01N30/74;G01N30/34;G01N30/86
申请人地址：	225000 江苏省扬州市广陵区临江路205号食品产业园2号楼
主权项：	1.一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，其特征在于包括如下步骤：（1）取待试成药研成粉末，置显微镜下观察，初步判断是否含有山茱萸、杜仲、枸杞子、补骨脂、当归、黄芪、白芍、地龙及砂仁；（2）薄层鉴别；（2.1）取待试成药粉末，加甲醇，加热回流，浓缩后再加于中性氧化铝柱上，再以甲醇洗脱，脱液蒸干，残渣加水溶解，再以水饱和的正丁醇提取后，再蒸干，再加甲醇溶解，制成供试品溶液；另取山茱萸、黄芪、白芍、赤芍对照药材，以本节同样方法制成对照药材溶液；再取熊果酸、黄芪甲苷、芍药苷对照品，分别加甲醇制成对照品溶液；吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液点于同一硅胶G薄层板上，进行色谱分析，观察供试品溶液的色谱与对照药材溶液、对照品溶液的色谱的特征斑点的一致性；（2.2）取待试成药粉末，加甲醇，超声处理并过滤，滤液浓缩后作为供试品溶液；另取当归、补骨脂以同法制成对照药材溶液；再取蒿本内酯、补骨脂素和异补骨脂素，分别加甲醇制成对照品溶液；吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液点于同一硅胶G薄层板上，进行荧光色谱分析，观察供试品溶液的色谱与对照药材溶液、对照品溶液的色谱的特征斑点的一致性；（2.3）取待试成药粉末，加水后加热回流，滤过并浓缩后，用乙酸乙酯振摇提取后，再浓缩，作为供试品溶液Ⅰ；取待试成药粉末，加乙酸乙酯，超声处理后滤过，滤液浓缩，作为供试品溶液Ⅱ；另取枸杞子对照药材，按照供试品溶液Ⅰ制备方法制成对照药材溶液；再取杜仲对照药材，按照供试品溶液Ⅱ制备方法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液Ⅰ、供试品溶液Ⅱ、对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，进行荧光色谱分析，观察供试品溶液的色谱与对照药材溶液色谱的特征斑点的一致性；（3）莫诺苷与马钱苷的定量分析：用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以质量含量0.3％的磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，在240nm波长处进行HPLC分析；获取莫诺苷与马钱苷的峰面积，按照如下回归方程计算莫诺苷及马钱苷的含量：莫诺苷Y=16194X＋4280 回归系数0.9997 马钱苷Y=16186X＋9019 回归系数1 其中，Y为峰面积，X为含量，单位μg/mL；根据X的值计算成药中的莫诺苷与马钱苷含量和，以成药中的莫诺苷和马钱苷的总量不得低于0.56mg/g作为判断依据；（4）根据中药成分定性及定量是否符合标准作为判断益肾壮骨丸合格的依据。 2.根据权利要求1所述的一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，其特征在于：步骤（1）中，显微镜下观察时，果皮表皮细胞表面观多角形或长方形，直径16～30μm，垂周壁连珠状增厚，外平周壁颗粒状角质增厚，胞腔含淡橙黄色物，中果皮细胞橙棕色，多皱缩，初步判断为含有山茱萸；橡胶丝成条或扭曲成团，表面显颗粒状，初步判断为含有杜仲；种皮石细胞表面观不规则多角形，壁厚，波状弯曲，层纹清晰，初步判断为含有枸杞子；纤维成束或散离，直径8～30μm，壁厚，表面有纵裂纹，初生壁与次生壁分离，两端常断裂成须状或较平截，初步判断为含有黄芪；韧皮薄壁细胞纺锤形，壁略厚，表面有极微细的斜向交错纹理，有时可见菲薄的横隔，初步判断为当归；草酸钙簇晶直径11～35μm，存在于薄壁细胞中，排列成行，或一个细胞中含数个簇晶，初步判断为含有白芍；种皮栅状细胞侧面观有纵沟纹，光辉带1条，位于上侧近边缘处，顶面观多角形，胞腔极小，孔沟细，初步判断为含有补骨脂；内种皮厚壁细胞红棕色或黄棕色，表面观多角形，壁厚，非木化，胞腔内含硅质块，断面观为1列栅状细胞，内壁及侧壁极厚，胞腔偏外侧，内含硅质块，初步判断为含有砂仁；表皮细胞呈棕黄色，细胞界限不明显，布有暗棕色的色素颗粒，初步判断为含有地龙。 3.根据权利要求1所述的一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，其特征在于步骤（2.1）的具体做法是：取供试品粉末5g，加甲醇50mL，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至15mL，加于5g 、100～120目中性氧化铝柱上，用重量含量40％甲醇水溶液100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取山茱萸、黄芪、白芍、赤芍对照药材各1g，分别同法制成对照药材溶液；再取熊果酸、黄芪甲苷、芍药苷对照品，分别加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；薄层色谱法试验时，吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液和对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比13﹕6﹕2的二氯甲烷-甲醇-水溶液的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量浓度10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，再观察供试品溶液的色谱与对照药材溶液、对照品溶液的色谱的特征斑点的一致性。 4.根据权利要求1所述的一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，其特征在于步骤（2.2）的具体做法是：取供试品粉末2g，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；另取当归、补骨脂对照药材各1g，分别同法制成对照药材溶液；再取藁本内酯、补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；进行薄层色谱分析时，吸取上述六种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7﹕2的正己烷-乙酸乙酯溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；判断供试品与对照药材、对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。 5.根据权利要求1所述的一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，其特征在于步骤（2.3）的具体做法是：取供试品粉末5g，加水50mL，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至20mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，作为供试品溶液Ⅰ；再取供试品粉末2g，加乙酸乙酯30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液Ⅱ；另取枸杞子对照药材1g，按照供试品溶液Ⅰ制备方法制成对照药材溶液；再取杜仲对照药材1g，按照供试品溶液Ⅱ制备方法制成对照药材溶液；进行薄层色谱分析时，吸取供试品溶液Ⅰ5μL、供试品溶液Ⅱ5μL、对照药材溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比15﹕8﹕1.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；判断供试品与对照药材、对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。 6.根据权利要求1-5任一项所述的一种益肾壮骨丸中的中药成分检测方法，其特征在于步骤（3）中进行莫诺苷与马钱苷的定量分析的具体做法是：取供试品粉末5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量；超声处理，功率300W，频率50kHz，30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；分别精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱；以乙腈为流动相A，以重量含量0.3％的磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0mL；于柱温为30℃下，检测波长为240nm，获取莫诺苷与马钱苷的峰面积，然后再进行计算。
所属类别：	发明专利