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原文传递一种杜仲壮骨丸的质量检测方法

专利名称：	一种杜仲壮骨丸的质量检测方法
摘要：	本发明公开了一种杜仲壮骨丸的质量检测方法。所述杜仲壮骨丸由杜仲、人参、三七、细辛、川芎、当归、秦艽、独活、白术、桑枝、木瓜、续断、附片、黄芪、防风、乌梢蛇、金铁锁、狗骨胶、石楠藤、淫羊藿、大血藤、威灵仙和肿节风。提供的质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；鉴别方法包括对黄芪、淫羊藿、三七、人参或肿节风的薄层鉴别检测；含量测定方法包括对马兜铃酸I、马兜铃内酰胺‑I或淫羊藿苷的含量测定。所述质量检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物临床药效的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵阳德昌祥药业有限公司
发明人：	葛秋平;张仕林;刘莉;尚秘;吴劲勇;李吉爽;吴周维;毛松
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910545252.5
公开号：	CN110320311A
代理机构：	北京联创佳为专利事务所(普通合伙)
代理人：	张梅
分类号：	G01N30/90(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	550201 贵州省贵阳市修文县扎佐医药园A区8号
主权项：	1.一种杜仲壮骨丸的质量检测方法，所述杜仲壮骨丸按照重量份计，由杜仲81份、人参32.4份、三七32.4份、细辛16.2份、川芎48.6份、当归48.6份、秦艽64.8份、独活48.6份、白术64.8份、桑枝81.0份、木瓜48.6份、续断48.6份、附片32.4份、黄芪81份、防风48.6份、乌梢蛇13.5份、金铁锁16.2份、狗骨胶13份、石楠藤81份、淫羊藿81份、大血藤54份、威灵仙48.6份和肿节风81份按照下述方法制备而成：根据配方将人参、细辛、乌梢蛇、金铁锁、狗骨胶、三七及部分当归、川芎、独活、秦艽、白术干燥，粉碎成细粉，得药粉备用；将杜仲、桑枝、淫羊藿、木瓜、续断、石楠藤、附片、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、肿节风以及剩余的当归、川芎、独活、秦艽、白术加水提取，过滤，滤液浓缩成浸膏；将上述浸膏、药粉及适量辅料混匀，干燥，包衣，即得；其特征在于：所述杜仲壮骨丸的质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄芪、淫羊藿、三七、人参或肿节风的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对马兜铃酸I、马兜铃内酰胺-I或淫羊藿苷的含量测定。 2.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述黄芪的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加乙醇40-60ml，加热回流20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚洗涤2-3次，每次20ml，弃去乙醚液，取水溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取2-4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2-4次，每次20ml，取正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，溶液加于中性氧化铝柱100-120目、5g、内径1.5cm上，先用甲醇30-50ml洗涤，弃去洗涤液，用30-50％甲醇40-60ml洗脱，收集洗脱液至水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝7-13：2-4：0.1-0.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热2-5分钟，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 3.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述淫羊藿的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加乙醇40-60ml，50-70℃温浸20-40分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿对照药材1g，同法制成对照药材溶液，即得；取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；照中国药典通则0502薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各15μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝7-13:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝溶液，在100-120℃加热2-5分钟，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 4.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述三七、人参的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加甲醇40-60ml，加热回流提取20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-20ml使溶解，用三氯甲烷洗涤2-3次，每次10ml，弃去三氯甲烷液，用水饱和的正丁醇振摇提取2-3次，每次10ml，合并正丁醇液，用0.5-1.5％氢氧化钠溶液洗涤2-3次，每次10ml，再用正丁醇饱和的水洗至中性，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七、人参对照药材各1g，同法制成对照药材溶液；取人参皂苷Rb1，人参皂苷Re，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述4种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝8-12：2-5：0.2-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热2-5分钟，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 5.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述肿节风的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加石油醚：乙醚＝1:1混合溶剂30ml，超声1-2h，过滤，滤渣用5-15ml乙醚洗涤，挥干滤渣表面溶剂，加50-70％甲醇60-80ml，超声20-40min，过滤，滤渣用5-15ml乙酸乙酯洗涤，蒸干滤液，残渣加30-50ml水溶解，用三氯甲烷提取2-3次，每次10-20ml，收集三氯甲烷层，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品；取肿节风对照药材1g，同法制得对照药材溶液；取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝6-12：3-5：0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 6.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述马兜铃酸I、马兜铃内酰胺-I的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，1％乙酸-0.02％三乙胺水溶液为流动相B；检测波长：316nm；流速：0.6-1ml/min；柱温：25-35℃，流动相梯度洗脱见下表：对照品溶液的制备：马兜铃酸I：精密称取马兜玲酸I对照品2-3mg，加甲醇溶解并制成每1ml中含马兜玲酸I0.002mg的对照品溶液，摇匀，即得；马兜铃内酰胺-I：精密称取马兜铃内酰胺I对照品2-3mg，加甲醇溶解并制成每1ml中含马兜铃内酰胺I0.0426mg，摇匀，即得；供试品溶液的制备：取本品40丸，除去包衣，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇40-60ml，称定重量，超声提取30-50分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 7.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述淫羊藿苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝25-30:70-75为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算大于5000；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含18μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品40丸，除去包衣，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，称定重量，超声处理25-35分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 8.根据权利要求1所述的杜仲壮骨丸的质量检测方法，其特征在于：所述杜仲壮骨丸的质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄芪、淫羊藿、三七、人参或肿节风的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对马兜铃酸I、马兜铃内酰胺-I或淫羊藿苷的含量测定，具体如下所示：性状：本品为黑色糖衣浓缩水丸，除去糖衣后显棕褐色；气香，味微苦；鉴别：(1)黄芪的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加乙醇50ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚洗涤2次，每次20ml，弃去乙醚液，取水溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水溶液洗涤3次，每次20ml，取正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，溶液加于中性氧化铝柱100-120目、5g、内径1.5cm上，先用甲醇40ml洗涤，弃去洗涤液，用40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液至水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典通薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝10：3：0.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-5分钟，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (2)淫羊藿的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加乙醇50ml，60℃温浸30分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿对照药材1g，同法制成对照药材溶液，即得；取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各15μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10:1:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝溶液，在105℃加热2-5分钟，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3)三七、人参的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加甲醇50ml，加热回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用三氯甲烷洗涤2次，每次10ml，弃去三氯甲烷液，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，用1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次10ml，再用正丁醇饱和的水洗至中性，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七、人参对照药材各1g，同法制成对照药材溶液；取人参皂苷Rb1，人参皂苷Re，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述4种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝10：4：0.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-5分钟，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4)肿节风的鉴别方法为：取本品40丸，研细，取7g，加石油醚：乙醚＝1:1混合溶剂30ml，超声1h，过滤，滤渣用10ml乙醚洗涤，挥干滤渣表面溶剂，加60％甲醇70ml，超声30min，过滤，滤渣用10ml乙酸乙酯洗涤，蒸干滤液，残渣加40ml水溶解，用三氯甲烷提取2次，每次15ml，收集三氯甲烷层，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品；取肿节风对照药材1g，同法制得对照药材溶液；取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝9：4：1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查：符合中国药典丸剂项下的各项规定；含量测定：(5)马兜铃酸I、马兜铃内酰胺-I的含量检测方法为：照中国药典通则0512高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，1％乙酸-0.02％三乙胺水溶液为流动相B；检测波长：316nm；流速：0.8ml/min；柱温：30℃，流动相梯度洗脱见下表：对照品溶液的制备：马兜铃酸I：精密称取马兜玲酸I对照品2.3mg，加甲醇溶解并制成每1ml中含马兜玲酸I0.002mg的对照品溶液，摇匀，即得；马兜铃内酰胺-I：精密称取马兜铃内酰胺I对照品2.13mg，加甲醇溶解并制成每1ml中含马兜铃内酰胺I0.0426mg，摇匀，即得；供试品溶液的制备：取本品40丸，除去包衣，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇50ml，称定重量，超声提取40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得； (6)淫羊藿苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝28:72为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算大于5000；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含18μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品40丸，除去包衣，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
所属类别：	发明专利