详情

原文传递一种测定促卵泡激素的方法

专利名称：	一种测定促卵泡激素的方法
摘要：	本发明涉及生物检测方法的技术领域，具体涉及一种测定促卵泡激素的方法，包括以下步骤：(1)制作微流控芯片；(2)将水凝胶与捕获抗体混合后固化在微流控芯片内；(3)加入检测样本并孵育,使检测样本中的FSH与捕获抗体结合；(4)加入被染色的检测抗体并孵育，使染色后的检测抗体与FSH‑抗体结合物结合发出荧光；(5)对检测后的水凝胶进行拍照，并分析拍摄的图片的荧光强度，计算检测样品中促卵泡激素的含量。本发明的测定促卵泡激素的方法，通过微流控技术与ELISA的结合，产生了新型检测方式，所需样品量少，实现了对于检测样品中FSH含量的一步、快速定量检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	武汉大学
发明人：	杨奕;朱娇梦
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
申请号：	CN201911402605.2
公开号：	CN111044735A
代理机构：	武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	石超群
分类号：	G01N33/76;G01N33/50;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/76;G01N33/50
申请人地址：	430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学
主权项：	1.一种测定促卵泡激素的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)制作微流控芯片； (2)将水凝胶与捕获抗体混合后固化在微流控芯片内； (3)加入检测样本并孵育,使检测样本中的FSH与捕获抗体结合； (4)加入被染色的检测抗体并孵育，使染色后的检测抗体与FSH-抗体结合物结合发出荧光； (5)对检测后的水凝胶进行拍照，并分析拍摄的图片的荧光强度，计算检测样品中促卵泡激素的含量。 2.根据权利要求1所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，微流控芯片包括反应部及与反应部连通的三个入口流道和出口流道；所述步骤(2)中，将水凝胶与捕获抗体混合后并固化在所述反应部；所述步骤(3)和(4)中，分别通过不同的入口流道将检测样本和被染色的检测抗体注入反应部。 3.根据权利要求2所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述三个入口流道汇流后再通过多个入口支路与所述反应部连通。 4.根据权利要求2所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述入口流道的宽度为150-200μm，高度为80-100μm；所述反应部为圆形腔体，圆形腔体的半径为450-500μm，高度为80-100μm。 5.根据权利要求1所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，水凝胶为质量百分数为10％-30％的GelMA水凝胶，将捕获抗体溶液与水凝胶以1:8-10的体积比混合均匀，然后进行紫外光固化，再用PBS缓冲液进行冲洗；捕获抗体溶液中捕获抗体的浓度为2-5mg/L。 6.根据权利要求1所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，检测样本为血液或者血清样本，在22-25℃、45-50rmp下孵育至检测样本中的FSH与捕获抗体结合，再用PBS缓冲液进行冲洗。 7.根据权利要求1所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，检测抗体采用DY647P4染料进行染色，检测抗体与DY647P4染料的摩尔比为25-28:1，然后使用1mol/L的碳酸氢钠将混合物的pH调至9.0，在22-25℃、45-50rmp下孵育至染料与检测抗体结合，再用PBS缓冲液进行冲洗。 8.根据权利要求1所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，在22-25℃、45-50rmp下孵育至染色后的检测抗体与FSH-抗体结合物结合发出荧光，再用PBS缓冲液进行冲洗。 9.根据权利要求1所述的测定促卵泡激素的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，采用Image-Pro Plus对拍摄的图片进行荧光强度的分析，与标准荧光强度/含量曲线做对比，计算检测样品中促卵泡激素的含量。
所属类别：	发明专利