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原文传递一种多元SERS生物检测的方法

专利名称：	一种多元SERS生物检测的方法
摘要：	本发明涉及一种多元SERS生物检测的方法，属于生物医学研究和临床检测的技术领域。本发明将具有不同反射峰的水凝胶光子晶体分别修饰上不同抗体作为基底，与具有强SERS信号的银纳米粒子结合，制备出抗体/4‑MBA/Ag纳米粒子作为SERS免疫探针，最后将两者加入到多组份待测抗原中，形成“固相免疫基底‑对应抗原‑SERS免疫探针”夹心复合结构。通过检测水凝胶光子晶体编码微球的反射峰位置和偏光显微镜照片来确定待测抗原的种类，最终实现对多种抗原的同时检测。本发明制备的反蛋白石水凝胶光子晶体具有编码稳定，生物相容性好，比表面积大等优点，提出的多元检测方法灵敏度高，交叉干扰小。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	扬州大学
发明人：	李娟;杨慧贞;李佳音;徐蓉
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-09T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-04T00:00:00+0800
申请号：	CN202111499439.X
公开号：	CN114136952A
代理机构：	扬州市锦江专利事务所
代理人：	江平
分类号：	G01N21/65;B82Y15/00;G;B;G01;B82;G01N;B82Y;G01N21;B82Y15;G01N21/65;B82Y15/00
申请人地址：	225009 江苏省扬州市大学南路88号
主权项：	1.一种多元SERS生物检测的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.反蛋白石水凝胶光子晶体编码微球的制备： 1)将不同编码的二氧化硅光子晶体微球浸泡于浓硫酸和双氧水的混合液中，清洗后在惰性环境下吹干，得到中间产物1； 2)将所述中间产物1置于含有PEGDA、丙烯酸、光引发剂以及超纯水的水凝胶前体溶液中静置4h，然后置于紫外灯下光固化10分钟，得到中间产物2； 3)将所述中间产物2放入氢氟酸溶液中刻蚀，清洗获得反蛋白石水凝胶光子晶体编码微球； S2.抗体的固定： 1)将具有同种编码的反蛋白石水凝胶光子晶体编码微球置于EDC和NHS的混合溶液中孵育，得到中间产物3； 2)将所述中间产物3置于抗体的缓冲溶液中反应，得到抗体固定于表面的反蛋白石水凝胶光子晶体编码微球； S3.制备拉曼信号放大探针：向拉曼探针分子和金属纳米颗粒缓冲溶液中，加入抗体的缓冲溶液，反应后获得抗体的拉曼信号放大探针； S4.多元SERS生物检测：将抗体固定于表面的反蛋白石水凝胶光子晶体编码微球和对应的抗体的拉曼信号放大探针加入待测生物混合溶液中，反应后形成产物，检测所述产物表面的拉曼信号，确定待测生物分子的浓度。 2.根据权利要求1所述多元SERS生物检测的方法，其特征在于，所述光引发剂采用HMPP，所述水凝胶前体溶液包括质量分数如下的成分：PEGDA40-90 wt%、丙烯酸2-4 wt%、HMPP 1wt%以及余量的超纯水。 3.根据权利要求1所述多元SERS生物检测的方法，其特征在于，所述金属纳米颗粒缓冲溶液中，金属纳米选自金纳米、银纳米中的至少一种。 4.根据权利要求1所述多元SERS生物检测的方法，其特征在于，所述EDC和NHS的混合溶液中，EDC和NHS的质量比为1-2:1。 5.根据权利要求1所述多元SERS生物检测的方法，其特征在于，所述待测生物分子选自肿瘤标记物CEA、AFP、CA125、CA199、CA211和CA724中的至少一种。 6.根据权利要求1所述多元SERS生物检测的方法，其特征在于，S4中，所述反应的温度为25-37℃，反应时间为25-60 分钟。
所属类别：	发明专利