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1.一种比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法,包括以下步骤: (1)将MnO2纳米颗粒的水溶液与3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液加入pH = 4.0的HAc-NaAc缓冲溶液中混合,于20~30℃反应5~20min后,再分别加入不同浓度的亚硝酸盐标准溶液得到一系列混合溶液,20~40℃加热孵育10~30 min;根据亚硝酸根浓度不同,反应液呈现从蓝色-黄绿-黄色渐进的颜色梯度变化,对应浓度溶液的颜色拍照后即为定性或半定量分析标准比色卡; (2)待反应结束,用紫外可见分光光度计同时测量溶液在652 nm 和452 nm 两个波长下的吸光度值A652和A452;建立A452/A652吸光度比值与亚硝酸盐浓度的关系曲线,即为检测亚硝酸盐的工作曲线; 亚硝酸盐溶液的浓度范围在0.15-12.5 μg/mL时,吸光度的比值A452/A652与亚硝酸盐浓度成线性关系,工作曲线的线性方程为: I = 0.4775 + 0.0812 C 其中:I 表示652 nm 和452 nm两个波长下吸光度的比值A452/A652,C表示亚硝酸盐的浓度,单位μg/mL; (3)将MnO2纳米颗粒的水溶液与3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液加入pH = 4.0的HAc-NaAc缓冲溶液中混合,再在混合体系中加入所含亚硝酸盐的待测样品,该混合物于20~40℃加热孵育10~30 min,待反应完成后测定在652 nm 和452 nm 两个波长下的吸光度值A652和A452,然后将A452/A652比值代入工作曲线的线性方程,计算得到待测样品中亚硝酸盐的浓度;定性或半定量分析时,将反应完成后的反应液与上述定性或半定量分析标准比色卡对比,即可定性或估算待测液中亚硝酸根的含量。 2.如权利要求1所述的比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法,其特征在于:步骤(1)、(3)中,所述MnO2纳米颗粒的浓度为0.2~1.0 mg/mL;所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.1~0.5 mM。 3.如权利要求1所述的比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述混合溶液中的亚硝酸盐的浓度范围为0.15~12.5 μg/mL。 4.如权利要求1所述的比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法,其特征在于:步骤(1)、(3)中,所述MnO2NPs的制备方法为:将MnCl2和NaOH依次加入牛血清白蛋白溶液于室温搅拌得到棕色产物,使用透析膜进行透析即得;所述MnCl2的浓度为0.8~1.2 mol/L,NaOH的浓度为0.8~1.2 mol/L,牛血清白蛋白的浓度为15~25 mg/mL;所述室温下搅拌时间为1~5 h;所述透析膜分子量MW = 3.5 kDa,透析时间为10~15 h。 |