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原文传递一种比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法

专利名称：	一种比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法
摘要：	本发明公开了一种比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法，本发明利用MnO2纳米颗粒在酸性条件下的类氧化酶活性，将无色的3,3',5,5'‑四甲基联苯胺氧化成蓝色的TMB氧化产物TMBox，当该反应溶液中加入亚硝酸盐，蓝色的TMBox被NO2‑进一步氧化生成黄色的二亚胺衍生物，据此建立了NO2‑的浓度与两种氧化产物的吸光度比值A452/A652的线性关系，实现对食品中亚硝酸盐的定量检测。与单波长光度法相比，比率吸光度法能够提供更高的灵敏度和选择性，同时也可以实现肉眼可视化的检测。本发明使用仪器简单、成本低、选择性好、结果准确可靠。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	甘肃;62
申请人：	中华人民共和国兰州海关
发明人：	赵生国;汪春娟;王新潮;马鑫;姬良亮;王波;张泰恒;祁光增;侍金梅;彭波
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-19T00:00:00+0800
发布日期：	2022-12-09T00:00:00+0800
申请号：	CN202211138239.6
公开号：	CN115452816A
代理机构：	兰州智和专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	张英荷
分类号：	G01N21/78;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/78
申请人地址：	730070 甘肃省兰州市安宁区银安路9号
主权项：	1.一种比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法，包括以下步骤：（1）将MnO2纳米颗粒的水溶液与3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液加入pH = 4.0的HAc-NaAc缓冲溶液中混合，于20~30℃反应5~20min后，再分别加入不同浓度的亚硝酸盐标准溶液得到一系列混合溶液，20~40℃加热孵育10~30 min；根据亚硝酸根浓度不同，反应液呈现从蓝色-黄绿-黄色渐进的颜色梯度变化，对应浓度溶液的颜色拍照后即为定性或半定量分析标准比色卡；（2）待反应结束，用紫外可见分光光度计同时测量溶液在652 nm 和452 nm 两个波长下的吸光度值A652和A452；建立A452/A652吸光度比值与亚硝酸盐浓度的关系曲线，即为检测亚硝酸盐的工作曲线；亚硝酸盐溶液的浓度范围在0.15-12.5 μg/mL时，吸光度的比值A452/A652与亚硝酸盐浓度成线性关系，工作曲线的线性方程为： I = 0.4775 + 0.0812 C 其中：I 表示652 nm 和452 nm两个波长下吸光度的比值A452/A652，C表示亚硝酸盐的浓度，单位μg/mL；（3）将MnO2纳米颗粒的水溶液与3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液加入pH = 4.0的HAc-NaAc缓冲溶液中混合，再在混合体系中加入所含亚硝酸盐的待测样品，该混合物于20~40℃加热孵育10~30 min，待反应完成后测定在652 nm 和452 nm 两个波长下的吸光度值A652和A452，然后将A452/A652比值代入工作曲线的线性方程，计算得到待测样品中亚硝酸盐的浓度；定性或半定量分析时，将反应完成后的反应液与上述定性或半定量分析标准比色卡对比，即可定性或估算待测液中亚硝酸根的含量。 2.如权利要求1所述的比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法，其特征在于：步骤（1）、（3）中，所述MnO2纳米颗粒的浓度为0.2~1.0 mg/mL；所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.1~0.5 mM。 3.如权利要求1所述的比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述混合溶液中的亚硝酸盐的浓度范围为0.15~12.5 μg/mL。 4.如权利要求1所述的比率吸光度比色法检测亚硝酸盐的方法，其特征在于：步骤（1）、（3）中，所述MnO2NPs的制备方法为：将MnCl2和NaOH依次加入牛血清白蛋白溶液于室温搅拌得到棕色产物，使用透析膜进行透析即得；所述MnCl2的浓度为0.8~1.2 mol/L，NaOH的浓度为0.8~1.2 mol/L，牛血清白蛋白的浓度为15~25 mg/mL；所述室温下搅拌时间为1~5 h；所述透析膜分子量MW = 3.5 kDa，透析时间为10~15 h。