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原文传递荧光比率检测乙酰胆碱的方法

专利名称：	荧光比率检测乙酰胆碱的方法
摘要：	本发明公开了荧光比率检测乙酰胆碱的方法，包括以下步骤：步骤一、配制等体积的含有相同浓度乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、辣根过氧化物酶、邻苯二胺和碳量子点，且含有不同浓度乙酰胆碱的多个标准溶液；步骤二、检测多个标准溶液在442nm和573nm处的荧光强度I442和I573，建立I573/I442与乙酰胆碱浓度之间的线性关系式；步骤三、配制未知乙酰胆碱浓度的待测溶液，检测其在442nm和573nm处的荧光强度I442和I573，根据步骤二中所得的线性关系式，即可计算待测溶液中的乙酰胆碱浓度。本发明具有操作简单、检测快速且灵敏度高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	南宁师范大学
发明人：	黄珊;肖琦;姚建东;刘义
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910384873.X
公开号：	CN110044859A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	靳浩
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	530023 广西壮族自治区南宁市西乡塘区明秀东路175号
主权项：	1.荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、配制等体积的含有相同浓度乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、辣根过氧化物酶、邻苯二胺和碳量子点，且含有不同浓度乙酰胆碱的多个标准溶液；步骤二、检测所述多个标准溶液在442nm和573nm处的荧光强度I442和I573，建立I573/I442与乙酰胆碱浓度之间的线性关系式；步骤三、配制与步骤一中的标准溶液相同体积相同乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶、辣根过氧化物酶、邻苯二胺和碳量子点浓度和未知乙酰胆碱浓度的待测溶液，检测其在442nm和573nm处的荧光强度I442和I573，根据步骤二中所得的线性关系式，即可计算待测溶液中的乙酰胆碱浓度。 2.如权利要求1所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，步骤一中，所述多个标准溶液的具体配制方法为：A、用乙酰胆碱干粉配置浓度为1×10-2mol/L的原液；B、将所述原液用Tris-HCl缓冲液进行梯度稀释，得不同浓度的乙酰胆碱标准溶液；C、分别向相同体积的所述不同浓度的乙酰胆碱标准溶液中加入相同体积的乙酰胆碱酯酶溶液、胆碱氧化酶溶液、辣根过氧化物酶溶液、邻苯二胺溶液和碳量子点溶液，混匀后，即得。 3.如权利要求2所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，B中，所述不同浓度的乙酰胆碱标准溶液的浓度具体为：0mol/L、5×10-5mol/L、1×10-4mol/L、1.5×10-4mol/L、2×10-4mol/L，所述Tris-HCl缓冲液的pH为7.4，浓度为0.05mol/L。 4.如权利要求3所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，C中，具体为：先分别向相同体积的所述不同浓度的乙酰胆碱标准溶液中加入相同体积的乙酰胆碱酯酶溶液、胆碱氧化酶溶液、辣根过氧化物酶溶液和邻苯二胺溶液，于37℃下混合30min后，再分别加入相同体积的碳量子点溶液，并用微量进样器搅拌，于常温下混合反应1min，即得。 5.如权利要求2或4任一所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，C中，所述乙酰胆碱酯酶溶液的浓度为80U/L，所述胆碱氧化酶溶液的浓度为4U/mL，所述辣根过氧化物酶溶液的浓度为1×10-5g/mL，所述邻苯二胺溶液的浓度为3×10-2mol/L，所述碳量子点溶液的浓度为5.3×10-6g/mL，且所述乙酰胆碱酯酶溶液、胆碱氧化酶溶液、辣根过氧化物酶溶液、邻苯二胺溶液和碳量子点溶液均由pH为7.4，浓度为0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液配制而成。 6.如权利要求1所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，步骤一中，所述碳量子点的制备方法为：称取0.20g精氨酸，加入20mL超纯水溶解，混合均匀后，将所得混合液转移至50mL反应釜中，于180℃下反应6h，自然冷却至室温后，将所得反应液用0.22μm的微孔滤膜过滤，取滤液冷冻干燥，即得。 7.如权利要求6所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，所述碳量子点制备时，将所述混合液转移至反应釜前，还包括，将所述混合液放入带有微电流发生器的容器中，进行通电处理，电流大小为10mA，处理时间为4min。 8.如权利要求1所述的荧光比率检测乙酰胆碱的方法，其特征在于，步骤二中，荧光检测的激发波长为380nm，激发和发射狭缝均为5nm。
所属类别：	发明专利