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原文传递一种测定人血浆中阿普斯特浓度的检测方法

专利名称：	一种测定人血浆中阿普斯特浓度的检测方法
摘要：	本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种测定人血浆中阿普斯特浓度的检测方法。所述血浆中阿普斯特浓度的检测方法，包括以下步骤：将含阿普斯特的血浆、阿普斯特‑d5的乙腈溶液混合进行沉淀反应，将所得上清液分别注入液相色谱‑质谱仪，进行多反应监测反应，用内标法以标准曲线计算血浆中阿普斯特的含量，所述标准曲线以阿普斯特的浓度为横坐标，以阿普斯特和阿普斯特‑d5的峰面积比值为纵坐标。本发明基于沉淀法和液质联用技术进行血浆中阿普斯特的检测，可用于检测生物体内的阿普斯特浓度，提供了一种快速、准确、稳定的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东省食品药品检验研究院
发明人：	张迅杰;石峰;巩丽萍;咸瑞卿;贺美莲;李春焕;由鹏飞;王聪聪
专利状态：	有效
申请日期：	2022-11-28T00:00:00+0800
发布日期：	2022-12-30T00:00:00+0800
申请号：	CN202211497301.0
公开号：	CN115541778A
代理机构：	北京元本知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	徐苹
分类号：	G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/34;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/34
申请人地址：	250000 山东省济南市高新区新泺大街2749号
主权项：	1.一种血浆中阿普斯特浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将含阿普斯特的血浆、阿普斯特-d5的乙腈溶液混合进行沉淀反应，将所得上清液分别注入液相色谱-质谱仪，进行多反应监测反应，用内标法以标准曲线计算血浆中阿普斯特的含量，所述标准曲线以阿普斯特的浓度为横坐标，以阿普斯特和阿普斯特-d5的峰面积比值为纵坐标。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述多反应监测反应中，所述阿普斯特的定量离子对为461.2→257.1，所述阿普斯特-d5的离子对为466.1→262.3。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱仪中液相条件为：色谱柱为Phenomenex Kinetex C18 (2.1×50 mm，2.6 µm)色谱柱，流动相A为含0.1%甲酸的水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脱，洗脱程序为洗脱程序为：0~0.5min，流动相A的体积百分含量保持63%，流动相B的体积含量保持37%；0.5~1.3 min，流动相A的体积百分含量从63%下降到0.0%，流动相B的体积百分含量从37%上升到100%；1.3~2.4min，流动相A的体积百分含量保持0.0%，流动相B的体积含量保持100%；2.4~2.41 min，流动相A的体积百分含量从0.0%上升到63%，流动相B的体积百分含量从100%下降到37%；2.41~3.0 min，流动相A的体积百分含量保持63%，流动相B的体积含量保持37%，流速为0.45 mL/min，柱温为40℃，进样量为5 µL。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱仪中质谱条件为：使用三重四级杆质谱仪，离子源为电喷雾离子源，采用负离子模式，采用多反应监测扫描模式，离子化电压：5500 V ；入口电压：10 V；碰撞室出口电压：13 V；喷雾气：50；辅助加热气：55；气帘气：35，碰撞能量：14 V，去簇电压：190 V。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合进行沉淀反应的具体操作为：将含阿普斯特的血浆、阿普斯特-d5的乙腈溶液混合，涡旋混合5 min，置4℃台式高速冷冻离心机中，4750 r/min离心10 min，每孔取上清100 µL，转移至另一96孔板，每孔加10%乙腈水溶液100 µL稀释，涡旋混合5 min后，注入液相色谱-质谱仪进行液质联用检测。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述标准曲线由包括以下步骤的方法制得：称量1 mg阿普斯特，用N，N-二甲基甲酰胺溶解得到1 mg/mL的阿普斯特母液，用50%乙腈水溶液稀释至质量浓度为100 ng/mL阿普斯特工作溶液，用50%乙腈水溶液将所述工作溶液稀释成40、80、200、600，2000，4000，9600和12000 ng/mL的标准曲线工作液，取空白血浆285 µL，加入不同浓度的标准曲线工作液15 µL，得到2.0，4.0，10.0，30.0，100.0，200.0，480.0和600.0 ng/mL的标准曲线样品，取所述标准曲线样品100 µL，加400 µL阿普斯特-d5的乙腈溶液进行沉淀反应，涡旋混合5 min，置4℃台式高速冷冻离心机中，4750 r/min离心10 min，每孔取上清100 µL，转移至另一96孔板，每孔加10%乙腈水溶液100 µL稀释，涡旋混合5 min进行液质联用检测，使用内标法对所得数据进行处理，以阿普斯特的浓度为横坐标，阿普斯特和阿普斯特-d5的峰面积比值为纵坐标，以1/x2为权重系数，利用加权最小二乘法进行线性回归，得到所述标准曲线。 7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述阿普斯特-d5的乙腈溶液的配制方法为：称量1 mg阿普斯特-d5标准品，用N，N-二甲基甲酰胺溶解，配成1 mg/mL的内标母液，用乙腈溶液进一步将内标母液稀释为浓度为20.0 ng/mL阿普斯特-d5的乙腈溶液。