详情

原文传递一种蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法

专利名称：	一种蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法
摘要：	本发明涉及蛋白质测试技术领域，提供一种蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，包括：先将蛋白质提取液置于截留分子量为8~12kDa且材质为再生纤维素的透析袋中进行透析，透析结束后，再采用等电点析出和冷冻干燥工艺得到蛋白质粉末，计算所述蛋白质提取率；所述蛋白质提取液是以毛发为原料在碱性的L‑半胱氨酸‑尿素复合液体中溶解得到；所述蛋白质提取液第一次置于透析袋进行透析时，采用的透析液为含有非离子表面活性剂的水溶液，且所述透析液中，非离子表面活性剂的浓度在其临界胶束浓度以下，该方法可以缩短第一次透析时透析袋完全填充满的时间，提高透析效率，从而避免因人为疏忽而导致的测试失败的情况。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉大学
发明人：	陈铭佳;杜巍;张琪;黄岚杰
专利状态：	有效
申请日期：	2023-10-25T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202311390577.3
公开号：	CN117129366A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王庆龙
分类号：	G01N5/04;G;G01;G01N;G01N5;G01N5/04
申请人地址：	430072 湖北省武汉市武昌区八一路299号
主权项：	1.一种蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，包括：先将蛋白质提取液置于截留分子量为8~12kDa且材质为再生纤维素的透析袋中进行透析，透析结束后，再采用等电点析出和冷冻干燥工艺得到蛋白质粉末，计算所述蛋白质提取率；所述蛋白质提取液是以毛发为原料在碱性的L-半胱氨酸-尿素复合液体中溶解得到；所述蛋白质提取液第一次置于透析袋进行透析时，采用的透析液为含有非离子表面活性剂的水溶液，且所述透析液中，非离子表面活性剂的浓度在其临界胶束浓度以下。 2.根据权利要求1所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述透析的过程为：第1次透析：将所述蛋白质提取液装入第一批透析袋中，使第一批透析袋中预留容积为50~70%，以所述含有非离子表面活性剂的水溶液为透析液在5~35℃下进行透析，至透析袋完全填充满时结束第1次透析；将所述第1次透析得到的保留液进行n次透析至所述透析结束；其中，n次透析中，每次透析时，是将第n-1次透析后的部分或者全部保留液装入第n批透析袋中，使第n批透析袋中预留容积为50~70%；且每次透析时，将透析液替换为未作为透析液用过的水，继续对装有保留液的第n-1批透析袋和第n批透析袋在5~35℃下进行透析，透析时间为8h以上；其中，n≥2；当在第n-1次透析中，透析8h以上时，透析袋完全填充满，则进行第n次透析；当在第n-1次透析中，透析8h以上时，透析袋未填充满，则判定透析结束。 3.根据权利要求2所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，透析时，透析袋中的保留液与透析液的体积比为200ml:40~60L。 4.根据权利要求1所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂为吐温20和/或吐温80。 5.根据权利要求4所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂为吐温20。 6.根据权利要求2所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述第n批透析袋置于含有非离子表面活性剂的水溶液中浸泡20~40min后使用，其中，n≥2。 7.根据权利要求6所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，除第一批透析袋外，其余所有透析袋均置于浓度为0.04~0.055mM的吐温20的水溶液中浸泡20~40min后使用。 8.根据权利要求1~7中任一项所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述蛋白质提取液中人发的溶解率≥30%，且所述蛋白质提取率≥25%。 9.根据权利要求8所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述蛋白质提取液中人发的溶解率≥70%。 10.根据权利要求8所述的蛋白质提取液中高分子量蛋白质提取率的测试方法，其特征在于，所述蛋白质提取液是以人发为原料在pH值≥8的L-半胱氨酸-尿素复合液体中溶解得到；所述L-半胱氨酸-尿素复合液体中，L-半胱氨酸的含量为2~20g/L，尿素的含量为1M以上；所述人发与L-半胱氨酸-尿素复合液体的质量体积比为1g:15~25ml。