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原文传递一种测定糖基化蛋白质分子量的方法

专利名称：	一种测定糖基化蛋白质分子量的方法
摘要：	本申请公开了一种测定糖基化蛋白质分子量的方法。本申请测定糖基化蛋白质分子量的方法，包括采用交联剂将待测糖基化蛋白质与已知分子量的核酸结合，形成结合产物；采用质谱检测结合产物的分子量；利用结合产物的分子量减去核酸和交联剂的分子量即获得待测糖基化蛋白质的分子量。本申请测定糖基化蛋白质分子量的方法，采用核酸替换抗体进行“异质性稀释”，成本低，具有更好的普遍适应性，不受抗体抗原结合能力或结合位点的影响；并且，核酸序列中可以根据需求设计和携带多个可碎裂单元，掉落一系列具有确定分子量的碎片，产生含多个价态的价态分布，从而提高价态和分子量测定的准确性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳湾实验室
发明人：	王冠博;陈清蓉;代荣荣
专利状态：	有效
申请日期：	2022-08-26T00:00:00+0800
发布日期：	2022-12-13T00:00:00+0800
申请号：	CN202211035312.7
公开号：	CN115469102A
代理机构：	深圳鼎合诚知识产权代理有限公司
代理人：	李小焦;彭家恩
分类号：	G01N33/68;G01N33/577;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/577
申请人地址：	518000 广东省深圳市光明区玉塘街道田寮社区光侨路高科创新中心一层102、二层202、三层304
主权项：	1.一种测定糖基化蛋白质分子量的方法，其特征在于：包括采用交联剂将待测糖基化蛋白质与已知分子量的核酸结合，形成结合产物；采用质谱检测结合产物的分子量；利用结合产物的分子量减去核酸和交联剂的分子量即获得待测糖基化蛋白质的分子量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述质谱检测包括，采用质谱全扫描模式，获得结合产物整体的信号，由于外接核酸的异质性稀释作用，使得结合产物的价态得以分辨。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述质谱检测还包括，利用质量选择器，将分子量分布窄的单一价态的结合产物离子亚群隔离选择出来作为前体离子，进行基于碰撞的气相解离反应，产生分子量确定且携带确定数量电荷的碎片，以及前体离子掉落碎片后的残骸离子；此时每降低相应于碎片所携带电荷数量的价态，残骸离子的分子量也相应减少一个碎片的分子量，使残骸离子产生含多个价态的价态分布；优选的，所述基于碰撞的气相解离反应为碰撞诱导解离或高能碰撞解离反应。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述前体离子的价态及分子量的计算公式如下，其中，为前体离子的m/z读数，m0为前体离子分子量，mchargecarrier为样品离子化过程中起电荷载体作用的微粒的分子量，z0为前体离子价态；为解离n个碎片后残骸离子的m/z读数，mfrag为每个碎片的分子量，zfrag为碎片携带的电荷数。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述交联剂具有能够与氨基酸残基结合的基团，以及能够与核酸结合的基团。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述交联剂的一端含有能与赖氨酸残基结合的基团，用于连接蛋白；另一端含有能与巯基反应的基团或者含有能与叠氮或四嗪反应的基团，与巯基反应的基团用于连接经巯基修饰的核酸，与叠氮或四嗪反应的基团用于连接经叠氮或四嗪修饰的核酸；优选的，与赖氨酸残基结合的基团为N-羟基琥珀酰亚胺基团；优选的，与巯基反应的基团为马来酰胺基团、降冰片烯基团或碘乙酰胺基团；优选的，与叠氮或四嗪反应的基团为炔基、双环[6.1.0]壬炔、二苯并环辛炔或反式环辛烯；优选的，所述交联剂为SPDP、DBCO-NHS ester、propargyl-PEG1-NHS ester或endo-BCN-PEG2-NHS ester。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述核酸为DNA或RNA，优选为DNA。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述核酸含有以气相离子形式存在时具有易于解离的结构成分；优选的，所述核酸为富含鸟嘌呤核苷酸的DNA；优选的，所述富含鸟嘌呤核苷酸的DNA在其末端，即远离交联剂结合位置的一端，具有若干个鸟嘌呤核苷酸。 9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于：还包括对结合产物进行价态还原，然后再进行质谱检测。 10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述对结合产物进行价态还原，具体包括，向结合产物中加入添加剂，降低结合产物价态；优选的，所述添加剂为咪唑，或由铵离子的同系物阳离子与甲酸根、乙酸根、碳酸根和碳酸氢根中的至少一种阴离子构成的盐；优选的，铵离子的同系物阳离子为铵离子中的一个或多个氢被烷基取代而成；优选的，烷基为甲基和/或乙基。