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原文传递一种新型冠状病毒感染疫苗免疫后抗体区分检测试剂盒

专利名称：	一种新型冠状病毒感染疫苗免疫后抗体区分检测试剂盒
摘要：	本发明提供了一种新型冠状病毒感染疫苗免疫后抗体区分检测试剂盒，其包括新型冠状病毒SARS‑CoV‑2(2019‑nCoV)重组N蛋白和重组S蛋白；该重组N蛋白的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.1，该重组S蛋白的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.2，该新型冠状病毒感染疫苗包括mRNA疫苗和灭活疫苗。本发明提供的ELISA试剂盒对mRNA疫苗免疫后抗体和灭活疫苗免疫后抗体的区分度为100％，特异性100％，敏感性强、重复性好，具有良好的科研领域及检测领域的实际应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	复旦大学
发明人：	荆雯雯;程训佳;冯萌;隋国栋;柯逸凡;王德禹
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-25T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202310751789.3
公开号：	CN117110616A
代理机构：	上海申新律师事务所
代理人：	郎祺
分类号：	G01N33/68;G01N33/58;G01N33/531;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/531
申请人地址：	200433 上海市杨浦区邯郸路220号
主权项：	1.一种新型冠状病毒感染疫苗免疫后抗体区分检测试剂盒，其特征在于，包括新型冠状病毒SARS-CoV-2重组N蛋白和重组S蛋白；所述重组N蛋白的编码核苷酸序列为SEQ IDNO.1，所述重组S蛋白的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.2。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述重组N蛋白和重组S蛋白的N端均有GST标签。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述重组N蛋白和重组S蛋白作为包被抗原包被在酶标板中。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述重组N蛋白和重组S蛋白在酶标板中的浓度为0.08-0.4μg/孔，优选为0.1-0.3μg/孔，更优选为0.2μg/孔。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶标二抗、洗涤液、稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。 6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述重组N蛋白和重组S蛋白通过如下步骤进行制备： (1)将新型冠状病毒SARS-CoV-2重组N蛋白及重组S蛋白的编码基因片段分别与原核表达载体连接； (2)分别将包括重组N蛋白和重组S蛋白的编码基因片段的原核表达载体转化至宿主菌种中诱导表达，培养所得重组工程菌并获得菌液，然后诱导其表达目的蛋白； (3)利用缓冲液对菌液进行洗涤，超声破碎后进行纯化； (4)利用谷胱甘肽还原系统对蛋白进行复性，收获所述包被抗原。 7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述步骤(4)包括： S4.1，根据纯化后的包涵体的质量按照10-20mg/ml湿重计算并称量重悬所需的増溶缓冲液，重悬包涵体并孵育直至其充分溶解； S4.2，透析：离心，将上清液转移到离心管或者透析袋内，用至少50倍上清液体积的含0.1mM DTT的Dialysis Buffer于4℃进行透析至少3h；更换透析液，透析过夜；次日换不含DTT的Dialysis Buffer 4℃继续透析2-6h，更换透析液，透析2-6h； S4.3，复性：采用体积大于步骤S4.2透析后获得的溶解蛋白体积的25倍的复性液进行透析复性，透析复性的条件优选为4℃透析过夜； S4.4，收获蛋白；优选地，所述复性液是通过向1×Dialysis Buffer中添加还原性谷胱甘肽和氧化性谷胱甘肽获得；优选地，在所述复性液中，还原性谷胱甘肽和氧化性谷胱甘肽的摩尔含量比为2-6：1，优选为5：1；更优选地，在所述复性液中，还原性谷胱甘肽的摩尔浓度为1mM，氧化性谷胱甘肽的摩尔浓度为0.2mM。 8.包括如权利要求1-7任一项所述试剂盒的区分检测新型冠状病毒感染疫苗免疫后抗体的系统，其特征在于，所述疫苗包括mRNA疫苗和灭活疫苗，所述系统包括如下单元：检测单元，所述检测单元基于所述试剂盒，指示如下步骤： (1)加入稀释后的待测样本进行孵育； (2)PBST洗板； (3)加入稀释后的酶标二抗并孵育； (4)PBST洗板； (5)加入显色液，避光显色； (6)加入终止液终止显色； (7)以酶标仪测定OD值；和结果判定单元，基于所述检测单元输出的检测结果，根据如下判定标准对疫苗进行区分： 1)当OD值大于或者等于0.3时判定为阳性，当OD值小于0.3时结果判定为阴性； 2)若抗N蛋白抗体为阴性，抗S蛋白抗体为阳性，疫苗为mRNA疫苗；若抗N蛋白抗体为阳性，抗S蛋白抗体为阳性，疫苗为灭活疫苗；若抗N蛋白抗体为阴性，抗S蛋白抗体为阴性，则未免疫。 9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，所述待测样本的稀释度为1:1～1:32000。 10.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，显色的时间为5-20分钟。
所属类别：	发明专利