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原文传递一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明涉及试剂盒技术领域，尤其涉及一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，包括检测卡、金标抗体工作液、洗涤液和比色卡；所述金标抗体工作液由胶体金浓缩液与金标抗体稀释液按体积比1:5～30的比例混合而成；洗涤液包括Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。利用该试剂盒可以快速、准确的检测2019‑nCOV，缩短了检测时间，操作简单方便。
专利类型：	发明专利
申请人：	潍坊市康华生物技术有限公司
发明人：	杨致亭;王传新;冯照雷;杜鲁涛;李娟;彭芹;杨金红
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T11:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010086730.3
公开号：	CN111208298A
代理机构：	潍坊正信致远知识产权代理有限公司
代理人：	李聚坤
分类号：	G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532;G01N21/78;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532;G01N21/78
申请人地址：	261023 山东省潍坊市经济开发区月河路699号
主权项：	1.一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：包括检测卡、金标抗体工作液、洗涤液和比色卡；所述检测卡包括上板块和下板块，所述上板块上设有反应窗口，所述下板块的内部设有反应膜和吸水垫，与所述反应窗口相对应的所述反应膜上设有包被羊抗鼠抗体的质控区、包被2019-nCOV的N蛋白抗原的第一检测区和包被2019-nCOV的S蛋白抗原的第二检测区；所述金标抗体工作液由胶体金标浓缩液与金标抗体稀释液混合而成；所述洗涤液包括Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。 2.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：每100ml所述金标抗体稀释液由121.1～242.2mg三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg的氯化钠、0.5～0.7mg的牛血清白蛋白、3～7wt％的甘露醇、2～10wt％的蔗糖、2mL的甘油、0.01～0.1wt％的PEG20000、0.01～0.1wt％的PVP40和蒸馏水配置而成。 3.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液配制时按照每100mL、10～20mM的Tris溶液中含有氯化钠0.9～2.0g、牛血清白蛋白0.3～0.6g、1ml10wt％的PVP-40、PC3000.1～0.5mL进行配制，其中所述Tris溶液的pH为8.0-8.5。 4.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述上板块和所述下板块为卡固连接，其中所述下板块的底面上设有卡槽，所述上板块的底面上设有与所述卡槽相适配的卡柱。 5.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述反应窗口为一个上底直径为1—3cm的倒锥形引流窗口，所述反应窗口的底部设有突出部。 6.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述下板块的两侧内壁上分别设有卡块。 7.一种如权利要求1所述的2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤： (1)包被反应膜 1)包被抗原用抗原包被液分别将2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCOV的S蛋白抗原稀释至终浓度为0.2mg/ml，再将配置的2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCoV的S蛋白抗原分别喷涂于反应膜上，形成第一检测区和第二检测区； 2)包被羊抗鼠抗体将PBS缓冲液将羊抗鼠IgG多抗稀释至2mg/ml，再将其喷涂于上述1)的反应膜上，形成质控区； (2)检测卡的组装将吸水垫放置于下板块内部，再将步骤(1)的反应膜放置在吸水垫上方，将上板块和下板块卡固在一起，检测板组装后在37℃条件下干燥2-4小时，在湿度小于40％的环境下平衡2小时后，放置在铝箔袋内封口保存； (3)金标抗体工作液的配置 1)胶体金的标记：取0.5～1wt％的氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，加入0.4～0.8wt％柠檬酸三钠溶液0.8～1mL，混匀，继续煮沸5～15分钟，冷却至室温，加入1mg/mL鼠抗人IgM单抗0.2～0.5mL，搅拌10～30min后再加入0.3～0.7mg牛血清白蛋白，继续搅拌10～30min，离心，弃去上清液，下层沉淀即金标浓缩液； 2)金标抗体稀释液配置：将121.1～242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg的氯化钠和0.5～0.7mg的牛血清白蛋白混合，加入双蒸水，溶解后依次加入3～7wt％甘露醇、2～10wt％蔗糖、2mL甘油、0.01～0.1wt％PEG20000，0.01～0.1wt％PVP40，定容至100mL，得到金标抗体稀释液； 3)将金标浓缩液与金标抗体稀释液按体积比1:5～30的比例混合，得到金标抗体工作液； (4)洗涤液的配置配制10～20mMTris溶液100mL，用HCl调节pH至8.0～8.5，得到Tris-HCl缓冲液，再依次加入NaCl0.9～2.0g、BSA0.3～0.6g、1mL10wt％PVP-40和PC3000.1～0.5mL，混匀，得到洗涤液； (5)试剂盒的组装将金标抗体工作液和洗涤液分别放入容量瓶内封装，将检测卡、金标抗体工作液瓶、洗涤液瓶以及比色卡分别放入包装盒内部，封装即可。 8.根据权利要求7所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：抗原包被量为0.2mg/ml的2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCoV的S蛋白抗原各0.5μl，所述羊抗鼠抗体包被量为2mg/ml的羊抗鼠抗体0.5μl。 9.根据权利要求7或8所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述抗原包被液由121.1～242.2mg三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg氯化钠、5-15ml甘油、1～3wt％海藻糖、0.01～0.1wt％明胶、0.1～0.5％Pro-clin300和双蒸水配置而成，所述抗原包被液的pH为8.0～8.5。
所属类别：	发明专利