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原文传递一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法

专利名称：	一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法
摘要：	本发明公开了医学检验技术领域的一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法，包括标记物预包被的样本杯和一个反应试剂条，所述反应试剂条包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、包被膜和吸水纸，所述样本杯上包被标记有标记指示物的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和兔IgG。本发明的免疫层析试剂盒，将免疫层析技术引入中和抗体的定性检测中，若标记物为荧光微球，必须搭配荧光检测仪使用，若标记物为带颜色的乳胶微球或胶体金则肉眼即可观察结果，实现了新冠病毒中和抗体的单人份快速定性检测，且灵敏度高，批内、批间差小，为临床使用提供了极大便利。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	厦门希吉亚医学科技有限公司
发明人：	沈智勇;温建新;段利朋
专利状态：	有效
申请日期：	2021-05-20T00:00:00+0800
发布日期：	2022-11-25T00:00:00+0800
申请号：	CN202110549179.6
公开号：	CN115389762A
分类号：	G01N33/569;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569
申请人地址：	361026 福建省厦门市海沧区后祥路71-7号401室
主权项：	1.一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，其特征在于，包括标记物预包被的样本杯和一个反应试剂条，所述反应试剂条包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、包被膜和吸水纸，所述样本杯上包被标记有标记指示物的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和兔IgG，所述包被膜包括平行设置且相互间隔的检测区和对照区，所述检测区包被有重组新冠病毒ACE2受体蛋白，所述对照区包被有羊抗兔IgG抗体；所述包被膜为硝酸纤维膜。 2.根据权利要求1所述的定性检测新型冠状病毒中和抗体的干式免疫层析试剂盒中样本杯中固定有标记指示物标记的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或RBD片段，其特征在于，所述标记指示物为荧光微球、染色乳胶微球或胶体金。 3.根据权利要求2所述的定性检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂条上包被抗体用的材料为硝酸纤维膜，检测线包被有重组新型冠状病毒ACE2受体蛋白。 4.一种权利要求1-3任意一项所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)在包被膜上分别固定重组新型冠状病毒ACE2受体蛋白和羊抗兔IgG抗体，形成检测区和对照区； (2)先制备标记有标记指示物的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或RBD片段，然后烘干或冻干固定在样本杯上； (3)在底衬上依次设置样品垫、包被膜和吸水纸，获得所述定性检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒。 5.权利要求4所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，所述步骤(1)和(2)中标记有标记荧光微球、有颜色乳胶微球的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和羊抗兔IgG抗体的制备方法包括如下步骤： (1)使用0.01-0.05mol/L的pH6.0的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，使微球终浓度为0.2g/L，室温反应15-30分钟，然后充分洗涤微球，用0.02-0.05mol/LpH7.4-7.6的硼酸盐缓冲液复溶； (2)按标记蛋白与微球的质量比为1:5-15的比例，在复溶后的微球中加入待标记蛋白，室温反应2小时，加入含有5％BSA的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液，室温反应30分钟，10000-15000rpm离心后洗涤，再用含有0.5％BSA，0.05％Tween-20的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液复溶至原体积； (3)兔IgG抗体的标记方法同重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白的标记方法。 6.权利要求4所述的定性检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒的制备方法，所述步骤(1)和(2)中标记有标记胶体金的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和羊抗兔IgG抗体的制备方法包括如下步骤： (1)制备好0.01％-0.04％氯金酸的胶体金溶液，粒径为30-60nm； (2)用0.2M K2CO3调节胶体金溶液的pH值到5.0-7.0左右，按照蛋白浓度为10-20ug/ml加入待标记蛋白，室温反应5-10min； (3)加入终浓度为0.1％的BSA或Casein进行终止； (4)10000-15000rpm离心后洗涤，再用含有0.5％BSA，0.05％Tween-20的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液复溶至原体积。 7.一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-6任意一项所述的检测新型冠状病毒中和抗体的干式免疫层析试剂盒。 8.根据权利要求4所述的一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法，其特征在于：还包括塑料卡壳以及全血样本稀释液，所述全血样本稀释液为PBS缓冲液，所述PBS缓冲液包括0.5％BSA或0.5％Casein。