详情

原文传递金胆片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用

专利名称：	金胆片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用
摘要：	本发明公开了金胆片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用，涉及金胆片指纹图谱技术领域，根据金胆片的处方成成构成特点，优选最佳的HPLC色谱条件，解决了特征色谱峰难以分开及杂质峰干扰大的难题，所得指纹图谱分离度高、峰形良好，各特征色谱峰均实现了良好的基线分离，稳定性好、特征峰多，能全面、准确地评价清金胆片的的质量，适用于对金胆片产品质量的控制；同时本发明中的检测方法以山柰酚为参比峰，确定了27个共有峰为构成金胆片指纹图谱的共有峰，从共用峰中鉴定出龙胆苦苷、虎杖苷、白藜芦醇、槲皮素、山柰酚、大黄素6种化学成分，并可以进行定量检测，指纹图谱组成更加丰富、全面。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	马鞍山市食品药品检验和药品不良反应监测中心
发明人：	吴勇;刘燕;丁茹;张瑞;姜泽慧;黄宇;张荣嘎;张卫东
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-27T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202310929147.8
公开号：	CN117129587A
代理机构：	合肥市科深知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	贾新伟
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
申请人地址：	243000 安徽省马鞍山市湖东中路159号
主权项：	1.金胆片指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括：步骤一：供试品溶液的制备：金胆片剂，研细，取0.2g～1.0g，精密称定，置磨口锥形瓶中，精密加入20％～100％甲醇25ml～100ml，精密称定，水浴回流提取30～120min,放置室温，称重，用上述溶剂补充减失重量，静置或离心，过0.45～0.22μm微孔滤膜滤过，即得金胆片剂供试品溶液；步骤二：混合对照品溶液的制备：分别取龙胆苦苷、虎杖苷、白藜芦醇、槲皮素、山柰酚及大黄素对照品约20mg，精密称定，用甲醇溶解，分别制成单一对照品储备液，再分别精密量取一定量对照品储备液置同一容量瓶中，用甲醇定容，得到含龙胆苦苷107.13μg/mL、虎杖苷91.53μg/mL、白藜芦醇45.58μg/mL、槲皮素43.49μg/mL、山柰酚36.93μg/mL及大黄素32.08μg/mL的混合对照品溶液；步骤三：确定HPLC的色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱4.6×250mm，5μm；柱温20～40℃；流速0.5～1.2ml/min；测定波长200～360nm；进样体积2～20μl；以乙腈为流动相A，0.02％～1.0％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱梯度洗脱程序见表1；表1 梯度洗脱程序时间/min 流动相A 流动相B 0→30 10.0％→42.5％ 90.0％→57.5％ 30～40 42.5％～90.0％ 57.5％→10％ 40～50 90.0％～35.0％ 10％→65.0％ 50～55 35.0％～10.0％ 65.0％→10％ 55～57 10.0％ 90.0％步骤四：高效液相色谱测定：分别精密吸取上述步骤一中的供试品溶液、步骤二中的对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；步骤五：建立指纹图谱：将对照品溶液色谱谱和供试品溶液色谱图导入指纹图谱软件，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得金胆片的指纹图谱，比较待测样品的色谱图和标准指纹图谱相似度。 2.根据权利要求1所述的金胆片指纹图谱的建立方法，其特征在于，金胆片以龙胆、虎杖、金钱草、猪胆膏为有效成分原料制成的。 3.根据权利要求1所述的金胆片指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤一金胆片剂的糖衣片需去除糖衣层。 4.根据权利要求1所述的金胆片指纹图谱的建立方法，其特征在于，供试品溶液的制备按下述方法进行：取金胆片，研细；取0.5g，精密称定，置磨口锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，精密称定，水浴回流提取60min，放置室温，称重，用80％甲醇补充减失重量，静置，过0.45μm微孔滤膜滤过，即得金胆片供试品溶液。 5.根据权利要求1所述的金胆片指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤三HPLC色谱条件具体为： C18色谱柱4.6×250mm，5μm，柱温30℃，流速1.0ml/min；测定波长270nm；进样体积10μl；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱。 6.根据权利要求1所述的金胆片指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤五中的指纹图谱软件为《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》。 7.根据权利要求1-6所述的金胆片指纹图谱，其特征在于，金胆片的指纹图谱采用如权利要求1-7任一项所述的方法建立得到，指纹图谱中有27个共有峰，并指认了9、13、17、18、19、20峰分别为龙胆苦苷、虎杖苷、白藜芦醇、槲皮素、山柰酚、大黄素。 8.根据权利要求7所述的金胆片指纹图谱，其特征在于，包括27个共有峰，其中以19号峰山柰酚为参比峰S，各共有峰相对保留时间如下：金胆片指纹图谱中27个共有峰的相对保留时间及RSD 峰号相对保留时间 RSD(％) 1 0.115～0.117 0.55 2 0.122～0.122 0.19 3 0.132～0.133 0.17 4 0.141～0.143 0.32 5 0.154～0.159 0.90 6 0.165～0.167 0.46 7 0.189～0.193 0.65 8 0.226～0.230 0.47 9 0.356～0.363 0.59 10 0.465～0.471 0.43 11 0.473～0.479 0.36 12 0.488～0.495 0.52 13 0.514～0.521 0.42 14 0.532～0.535 0.17 15 0.599～0.606 0.33 16 0.638～0.640 0.12 17 0.748～0.750 0.09 18 0.881～0.882 0.05 19 1.000～1.000 0.00 20 1.436～1.441 0.11 21 1.497～1.503 0.12 22 1.523～1.530 0.12 23 1.560～1.567 0.12 24 1.573～1.579 0.12 25 1.602～1.609 0.13 26 1.615～1.622 0.13 27 1.662～1.669 0.12 其中，各共有峰相对保留时间RSD值不大于1％。 9.一种金胆片指纹图谱的质量评价方法，其特征在于， S1：使用权利要求1-6中任一项所述的方法得到金胆片产品的指纹图谱。 S2：将所得金胆片产品的指纹图谱与标准指纹图谱进行对比，若相似度大于0.85，则说明该金胆片产品质量符合要求。
所属类别：	发明专利