原文传递
一种基于NAD(P)H荧光的醇脱氢酶的筛选鉴定方法
| 专利名称： | 一种基于NAD(P)H荧光的醇脱氢酶的筛选鉴定方法 |
| 摘要： | 本发明提供了一种基于NAD(P)H荧光的醇脱氢酶的快速筛选鉴定方法，所述方法基于醇脱氢酶以NAD(H)或NADP(H)为辅酶的特性，以96孔微孔板为反应容器，在反应体系中加入待测样本对醇进行氧化，在醇氧化的同时把不发射荧光的氧化型辅酶转化成能在一定激发光激发下发射荧光的还原型辅酶NADH或NADPH，通过测定反应液荧光强度的变化来筛选醇脱氢酶产生菌。本发明与已有的醇脱氢酶产生菌筛选方法相比，耗时短，精确率高，所需反应试剂微量，具有高通量筛选的特点，并且反应体系简单，操作过程简便，反应的干扰因素少。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 浙江工业大学 |
| 发明人： | 应向贤;汪钊;杨池;熊斌 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2011-11-16T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201110363897.0 |
| 公开号： | CN102517378A |
| 代理机构： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 |
| 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 分类号： | C12Q1/32(2006.01)I |
| 申请人地址： | 310014 浙江省杭州市下城区潮王路18号 |
| 主权项： | 一种基于NAD(P)H荧光的醇脱氢酶的筛选鉴定方法，所述方法包括：在96孔微孔板中，分别加入pH?7.0～8.8的Tris?HCl或pH?8.8～10.5的甘氨酸?NaOH缓冲液，然后往缓冲液中添加0.1％～2.0％的底物，0.5～1mM的辅酶NAD+或NADP+，以及待测样本，在0～80℃下反应1～48h后，反应液在激发波长340nm～380nm和发射波长450nm～470nm下检测荧光强度，在同等条件下以反应体系中不加入底物的反应液为对照，与对照相比，荧光强度增加值大于400的样本，即为含有对应醇脱氢 |
| 所属类别： | 发明专利 |
检索历史
应用推荐
