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一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法
| 专利名称： | 一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法 |
| 摘要： | 本发明是一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法。本方法将制备的细胞悬浮液加入优化后的fluo‑3AM，添加0.8mM Pluronic F‑127，获得最大荧光强度Fmax值，或添加钙离子螯合剂EGTA，获得最小荧光强度Fmin值，制备的细胞悬浮液加入优化后的fluo‑3AM经大气压冷等离子体处理，结合多功能酶标仪测定F值，再根据公式计算出绝对钙离子浓度。本发明实现了荧光探针flou‑3AM结合多功能酶标仪测定细胞绝对钙离子浓度的方法，该方法具有灵敏、高效、简便、精确测定和表征细胞内钙离子绝对浓度。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 辽宁;21 |
| 申请人： | 大连大学 |
| 发明人： | 董晓宇 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810120797.7 |
| 公开号： | CN108469427A |
| 代理机构： | 大连八方知识产权代理有限公司 21226 |
| 代理人： | 卫茂才 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01)I;G01N1/44(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N1;G01N21/64;G01N1/44 |
| 申请人地址： | 116622 辽宁省大连市开发区学府大街10号 |
| 主权项： | 1.一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1，制备细胞悬浮液；步骤2，优化fluo‑3AM使用条件(1)水浴温度和孵育时间优化将步骤1制备的细胞悬浮液加入fluo‑3AM，选取水浴温度30℃～44℃，孵育时间0min～120min处理，处理后的菌液进行细胞存活率分析选取最优；(2)探针fluo‑3AM终浓度和孵育时间优化将步骤1制备的细胞悬浮液加入fluo‑3AM，选取探针fluo‑3AM终浓度0～12μM，孵育时间0～215min处理，使用多功能酶标仪检测处理后细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，相对荧光强度最高的为最优；(3)探针装载顺序优化先等离子体处理—后装载探针和先装载探针—后等离子体处理，这两种顺序对细胞活性及细胞内钙离子浓度测定没有影响；步骤3，细胞质内绝对钙离子浓度测定步骤1制备的细胞悬浮液加入步骤2优化条件下的fluo‑3AM，添加0.8mM Pluronic F‑127，获得最大荧光强度Fmax值；或添加钙离子螯合剂EGTA，浓度范围为0～30nM，获得最小荧光强度Fmin值；步骤1制备的细胞悬浮液经大气压冷等离子体处理后加入步骤2优化条件下的fluo‑3AM或步骤1制备的细胞悬浮液先加入步骤3优化条件下的fluo‑3AM再经大气压冷等离子体处理，获得F值，根据公式(1)， |
| 所属类别： | 发明专利 |
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