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原文传递一种溶菌酶的室温磷光检测方法及应用

专利名称：	一种溶菌酶的室温磷光检测方法及应用
摘要：	一种溶菌酶的室温磷光检测方法及应用，属于溶菌酶的检测技术领域，可解决现有溶菌酶的检测过程复杂，成本高以及干扰大的问题，本发明利用制备的β‑环糊精修饰的Mn:ZnS室温磷光量子点为磷光探针，溶菌酶核酸适配体为分子识别单元，通过检测加入溶菌酶后体系的室温磷光强度实现对溶菌酶的分析检测。该磷光检测体系对溶菌酶的响应范围为5.5nM‑44.4nM，检出限为0.54nM。可用于血清、尿样、蜂蜜及葡萄酒中溶菌酶的检测，且在测定时无需复杂的样品预处理过程。室温磷光的产生也不需要加入除氧剂和诱导剂，并能够避免实际样品本底荧光和散射光的干扰。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	山西大学
发明人：	卫艳丽;左力翔;兰艺凤;宋秀丽;李欢欢;董川
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810589004.6
公开号：	CN108827921A
代理机构：	太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14110
代理人：	任林芳
分类号：	G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	030006 山西省太原市坞城路92号
主权项：	1.一种溶菌酶的室温磷光检测方法，其特征在于：包括如下步骤：第一步，制备Mn:ZnS量子点：将6‑SH‑β‑环糊精、ZnSO4和Mn(Ac)2按摩尔比为3:1:0.03‑0.05的比例混合，用NaOH调节体系的pH值至11，通氮气保护，室温下磁力搅拌30min；随后用注射器在隔绝空气的条件下快速加入与ZnSO4等摩尔的Na2S，室温下继续反应20‑40min；再将溶液加热至50‑70℃，空气中陈化2‑3h，得到6‑SH‑β‑环糊精包覆的Mn掺杂ZnS量子点粗产品，以与6‑SH‑β‑环糊精包覆的Mn掺杂ZnS量子点粗产品相同体积的无水乙醇使量子点沉降，高速离心，倾去上层清液，于室温真空干燥24 h，即可得到Mn:ZnS量子点固体粉末；第二步，配制Mn:ZnS量子点母液：称量50 mg Mn:ZnS量子点，二次去离子水定容在100 mL的容量瓶中；第三步，溶菌酶核酸适配体溶液的配制：先将溶菌酶核酸适配体离心5‑10min，将经离心的适配体溶解于10 mmol/L的磷酸缓冲液中配成浓度为100 μM的溶菌酶核酸适配体溶液，在90℃下加热10 min，冷却至室温，储存于‑20℃环境中备用，使用时用10 mmol/L的磷酸缓冲液稀释至1.0 μM；第四步，配制不同浓度梯度的溶菌酶标准溶液：分别配制浓度为5.5、11.1、16.7、22.2、27.8、33.3、38.9、44.4nM的溶菌酶标准溶液；第五步，检测标准曲线：分别取1mL的Mn:ZnS量子点母液、50 μL的溶菌酶核酸适配体溶液和500μL的不同浓度梯度的溶菌酶标准溶液，用磷酸缓冲溶液定容至5mL，转入10mm的石英比色皿中，置于荧光光谱仪中，设定激发波长316nm，激发狭缝为5nm，发射狭缝为10nm，扫描体系的磷光光谱图并记录其磷光发射强度；将每条曲线590nm处的磷光强度P对溶菌酶标准溶液的浓度c作图，获得标准曲线，拟合得出标准曲线方程；第六步，待测样品溶菌酶及其加标回收率的检测：待测样品溶菌酶的检测，用10 mmol/L的磷酸缓冲液将待测样品稀释至40‑100倍，在比色管中，按照Mn:ZnS量子点母液和溶菌酶核酸适配体溶液的体积比为1mL:50μL的比例，分别加入Mn:ZnS量子点母液和溶菌酶核酸适配体溶液，按照Mn:ZnS量子点母液的体积和整个待测体系的体积比为1:5的比例，用稀释后的待测样品定容，倒入石英比色皿中，进行磷光检测，选取的磷光的激发波长为316nm，发射波长为590nm；待测样品溶菌酶加标回收率的检测，用10 mmol/L的磷酸缓冲液将待测样品稀释至40‑100倍，在比色管中，按照Mn:ZnS量子点母液和溶菌酶核酸适配体溶液的体积比为1mL:50μL的比例，分别加入Mn:ZnS量子点母液和溶菌酶核酸适配体溶液，再分别加入500μL不同浓度的溶菌酶标准溶液样品，按照Mn:ZnS量子点母液的体积和整个待测体系的体积比为1:5的比例，用稀释后的待测样品定容，室温静置15min，然后将样品倒入比色池中，进行磷光检测，选取的磷光的激发波长为316nm，发射波长为590nm，每个浓度水平上重复3次，同时做空白样，根据检测的磷光强度测量值和标准曲线方程，计算出溶菌酶浓度值，得出溶菌酶在待测样品中的加标回收率。
所属类别：	发明专利