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原文传递一种基于硫代胆碱共反应促进剂电致化学发光适配体传感器及测定毒死蜱的方法

专利名称：	一种基于硫代胆碱共反应促进剂电致化学发光适配体传感器及测定毒死蜱的方法
摘要：	本发明涉及农残分析测定技术领域，特别是涉及一种基于硫代胆碱共反应促进剂电致化学发光适配体传感器及测定毒死蜱的方法，包括毒死蜱电致化学发光适配体传感器的制备步骤、使用该传感器测定毒死蜱的操作方法等；以酶解反应产生的硫代胆碱作为电致发光体系的共反应促进剂，构建适配体传感器用于检测农残毒死蜱，简捷快速，特异性好、灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	周长利;衣姜乐;陈培培;刘汉彪;夏方诠;田栋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910416643.7
公开号：	CN110186912A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	李茜
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于硫代胆碱共反应促进剂电致化学发光适配体传感器及测定毒死蜱的方法，其特征在于，硫代胆碱作为CdS+K2S2O8体系的共反应促进剂，硫代胆碱由酶解产生；Au NPs@CoFe2O4 MNPs负载毒死蜱适配体和乙酰胆碱酯酶，CdS@Au NPs@rGO/GCE负载毒死蜱适配体的互补链，实现对毒死蜱的高灵敏特异性检测。 2.权利要求1所述的一种基于硫代胆碱共反应促进剂电致化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：将8.0 μL、10-7 mol/L毒死蜱互补链cDNA滴涂到CdS@Au NPs@rGO/GCE表面，置于冰箱冷藏过夜，用pH 7.4的PBS清洗。 3.之后滴涂4.0 μL、10 μmol/L 6-巯基己醇，在37 °C下孵化60 min，再用pH 7.4的PBS缓冲液冲洗，得cDNA/CdS@Au NPs@rGO/GCE；（2）将200.0 µL、250 µg/mL乙酰胆碱酯酶、100.0 µL、1.0 µmol/L毒死蜱适配体Apt加入到300.0 µL Au NPs@CoFe2O4 MNPs混合溶液中孵化过夜，离心洗涤，得Apt/AChE-Au NPs@CoFe2O4，分散到1.0 mL Tris-HCl中存储备用；（3）将8.0 μL Apt/AChE-Au NPs@CoFe2O4滴涂到cDNA/CdS@Au NPs@rGO/GCE表面，在37°C下孵化60 min再用pH 7.4的PBS缓冲液冲洗，置于4 °C存储备用。 4.权利要求2所述的CdS@Au NPs@rGO/GCE，其特征在于，制备步骤如下：（1）将1 mg/mL Au NPs@rGO分散在30.0 mL超纯水中，加入0.1861 g Cd(NO3)2·4H2O溶解，并在搅拌下加热到70 °C；（2）将0.5960 g Na2S·9H2O 溶解于30 mL超纯水中，并缓慢加入到上述混合溶液中，在70 °C下持续搅拌3 h；离心洗涤，分散在超纯水中，得CdS@Au NPs@rGO分散液；（3）取8.0 μL CdS@Au NPs@rGO分散液滴涂到处理好的玻碳电极表面，自然晾干，得CdS@Au NPs@rGO/GCE。 5.权利要求2所述的Au NPs@CoFe2O4 MNPs，其特征在于，其制备方法如下：称取0.2 g CuCl2·2H2O和0.54 g FeCl3·6H2O溶于16.0 mL乙二醇，剧烈搅拌10 min，然后加入1.44 g 醋酸钠、1.2 g尿素和0.4 g聚乙二醇4000，剧烈搅拌混合物45 min，然后密封在高压釜中；将高压釜加热至200 ℃并保持10 h，然后冷却至室温，用超纯水离心洗涤并重新分散，得CoFe2O4 MNPs分散液；搅拌下，将1.2 mL、0.1 mol/L硼氢化钠加入到40.0 mL含0.25 mmol/L柠檬酸钠·二水，0.25 mmol/L HAuCl4和0.5 mg/mL CoFe2O4 MNPs的混合溶液中，老化6 h，得到Au NPs@CoFe2O4 MNPs复合材料。 6.权利要求1-2任一项所述的电致化学发光适配体传感器用于检测农残毒死蜱。 7.根据权利要求5所述的检测农残毒死蜱，其特征在于，步骤如下：将不同浓度的毒死蜱滴涂于上述构建的适配体传感器的表面，在37 °C下孵化60 min，再用pH 7.4的PBS缓冲液冲洗；在含有0.4 mol/L氯化乙酰胆碱和0.1 mol/LK2S2O8的pH 7.4 PBS缓冲溶液中，以制备的适配体传感器为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为辅助电极，在-1.5~0.0 V电位区间内进行循环伏安扫描，光电倍增管800 V，记录得到的光强结果。
所属类别：	发明专利