详情

原文传递水产品中多种海洋生物毒素的液质联用检测法

专利名称：	水产品中多种海洋生物毒素的液质联用检测法
摘要：	本发明公开了一种水产品中多种海洋生物毒素的液质联用检测法，待测水产品样品用0.1vol％甲酸水溶液、乙腈多次分级提取，分层得到上层有机相和下层水相；下层水相加入MCX‑HLB串联柱，低比例甲醇水淋洗，再用经dSPE净化的有机相进行一次洗脱，再用碱性甲醇进行二次洗脱，洗脱液定容后用高效液相色谱‑串联质谱联用仪进行检测，采用外标法定量，得到待测水产品样品中各待测成分的含量。本发明可一次就检测出8种涵盖亲水及亲脂的海洋生物毒素，首次实现一步式对亲水和亲脂性海洋生物毒素的液质联用高通量定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁波检验检疫科学技术研究院
发明人：	方科益;陈树兵;李双;陈颖;许迪明;曹国洲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910592515.8
公开号：	CN110146632A
代理机构：	浙江千克知识产权代理有限公司
代理人：	冷红梅
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	315012 浙江省宁波市海曙区马园路9号
主权项：	1.水产品中多种海洋生物毒素的液质联用检测法，所述海洋生物毒素包括：柱孢毒素CYN、软骨藻酸DA、脱氨甲酰基石房蛤毒素dc-STX、膝沟藻毒素GTX、鳍藻毒素DTX、冈田软海绵酸OA、微囊藻毒素LR、微囊藻毒素RR，其中鳍藻毒素DTX、冈田软海绵酸OA为亲脂性的，其余为亲水性的；所述方法包括以下步骤： (1)样品提取称取待测水产品样品2.00g，加入2mL0.1vol％甲酸水溶液，涡旋振荡1min，再加入5mL乙腈，涡旋振荡1min，超声5min，离心分离得到上清液A和残渣A，残渣A用1mL0.1vol％甲酸水溶液提取后离心分离得到上清液B和残渣B，残渣B用3mL乙腈提取、离心分离得到上清液C，将上清液A、B、C合并，加入0.1g甲酸铵，涡旋振荡1min，离心，得到的上清液分层，得到上层有机相D和下层水相E，待用； (2)净化将MCX柱在上，HLB柱在下，进行串联，活化后，将下层水相E倒入串联柱体系中，抽干，用5mL水和5mL体积比为2：8的甲醇-水溶液各淋洗一次，弃去淋洗液，抽干；将上层有机相D加入500mg中性氧化铝粉，15mg石墨化炭黑粉，涡旋振荡1min，离心取上清液，作为第一次洗脱剂加入串联柱体系中进行第一次洗脱，洗脱液接收瓶中预先加入0.5mL二甲亚砜；然后再用6mL体积比95：5的甲醇-氨水溶液进行第二次洗脱，所得洗脱液蒸至近干后用体积比5：5的乙腈-0.1vol％甲酸水溶液的混合溶液定容至2mL，过0.22μm尼龙滤膜过滤，得到供试品溶液； (3)高效液相色谱-串联质谱联用仪检测将供试品溶液用高效液相色谱-串联质谱联用仪进行检测，采用外标法定量，得到待测水产品样品中各待测成分的含量。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，高效液相色谱-串联质谱联用仪的检测条件如下： A.高效液相色谱分离色谱柱：Hypersile Gold C8色谱柱，流动相A：含有2mmol甲酸铵+0.1vol％甲酸的水溶液；流动相B：2mmol甲酸铵+0.1vol％甲酸的乙腈-水溶液，其中乙腈与水的体积比为95:5；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；洗脱程序见下表： HPLC洗脱程序时间min A％ B％ 0.00 95 5 4 95 5 7 5 95 13 5 95 13.1 95 5 18 95 5 B.质谱检测质谱条件：采用正负离子同时扫描，在多反应监控MRM模式下对目标物进行定量分析，电喷雾离子源条件如下： a)喷雾电压IS：4500V； b)离子源温度：450℃； c)碰撞气CAD为10psi； d)气帘气CUR为25psi； e)雾化气GS1为60psi； f)辅助加热气GS2为60psi。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，外标法定量的操作步骤为：将供试品溶液用高效液相色谱-质谱联用仪进行检测，得到供试品溶液的提取离子流色谱图，供试品溶液的各待测成分的的峰面积与与其对应的标准品的标准曲线比较，计算得到供试品溶液中各待测成分的浓度，相应换算得到待测水产品样品中各待测成分的含量；待测水产品样品中各待测成分的含量根据如下计算公式(1)得到： X＝C*V/m，式中： X－待测水产品样品中待测成分含量，单位为μg/kg； C－供试品溶液中待测成分的浓度，根据标准曲线计算得到，单位为μg/L V—定容体积，单位为mL； m－待测水产品样品质量，单位为g。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，串联柱上样前需要进行活化，所述活化操作为：依次加入5mL甲醇，5mL水，5mL 0.1vol％甲酸水溶液，进行活化。
所属类别：	发明专利