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一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法
| 专利名称： | 一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法 |
| 摘要： | 本发明提供一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法。所述方法包括添加硬脂酸酰亚胺来封闭多肽样品中的自由巯基，然后添加聚乙醇钠来封闭所述多肽中的分子间二硫键，从而避免其在检测多肽的过程中造成干扰。本发明的方法简单、有效，具有很高的检测灵敏度和准确度，从而具有良好的成本效益。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏食品药品职业技术学院 |
| 发明人： | 马宇春;朱玉洁 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-05-25T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-08-23T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910442577.0 |
| 公开号： | CN110161138A |
| 代理机构： | 杭州知杭知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 陈丽嫦 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 223005 江苏省淮安市高教园区枚乘路4号 |
| 主权项： | 1.一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法，所述方法包括以下步骤： 步骤1：准备待检测的多肽样品，并且利用含有0.4%乙醇的水杨酸溶液进行预处理，以消除部分杂质并调节多肽至pH 4-6； 步骤2：向步骤1获得的溶液中添加硬脂酸酰亚胺来封闭多肽样品中的自由巯基； 步骤3：通过加酸清除步骤2中过量的硬脂酸酰亚胺，然后向步骤2中获得的溶液中添加聚乙醇钠来封闭所述多肽中的分子间二硫键； 步骤4：除掉未结合的封闭试剂，使用0.4%碳酸氢钠将溶液pH调节至7-9，然后使用特异性还原试剂将被修饰的多肽半胱氨酸巯基还原成自由巯基； 步骤5：向步骤4中获得的溶液添加可逆性巯基标记试剂来标记多肽中的自由巯基；和 步骤6：对其中的自由巯基进行标记的多肽进行亲和纯化，然后进行高效液相色谱和质谱鉴定。 2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多肽选自谷胱甘肽、亮丙瑞林、替可克肽、艾塞那肽中的一种或多种。 3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤4中的特异性还原试剂选自抗坏血酸钠和次硫酸钠。 4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤5中的可逆性巯基标记试剂选自生物素苯磺酸酰亚胺、生物素硬脂酰亚胺、N-碘异丙酰生物素戊二胺和同位素亲和标签试剂。 5.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤1中将溶液的pH调节至5。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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