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原文传递一种中药制剂腰疼丸的检测方法

专利名称：	一种中药制剂腰疼丸的检测方法
摘要：	本发明涉及中药制剂的质量检测方法，特别涉及腰疼丸的质量检测方法。本发明所述的检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法包括显微镜观察法和薄层色谱法，显微镜观察法，该方法包括对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤显微特征的鉴定，鉴别方法如下：取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，脐点短缝状或人字状，为山药；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物，为盐补骨脂；草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，为续断；石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，壁较厚，纹孔细密，空腔较大，为南藤。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江西;36
申请人：	江西九华药业有限公司
发明人：	杨华;陈邦辉;谢明艳;许焰辉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-29T00:00:00+0800
申请号：	CN201910669581.0
公开号：	CN110389128A
代理机构：	北京华科联合专利事务所(普通合伙)
代理人：	王为;孟旭
分类号：	G01N21/84(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	342500 江西省赣州市瑞金市冯屋岗88号
主权项：	1.一种中药制剂腰疼丸的检测方法，其特征在于，包括鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法包括显微镜观察法和薄层色谱法，显微镜观察法，该方法包括对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤显微特征的鉴定，鉴别方法如下：取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状，为山药；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物，为盐补骨脂；草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，为续断；石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密，空腔较大，为南藤。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，薄层色谱法，该方法包括对补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷、齐墩果酸的鉴别，鉴别方法如下： (1)取腰疼丸，加乙酸乙酯，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材，加乙酸乙酯，同法制成对照材料溶液；再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯为展开剂，取出，晾干，喷以氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点； (2)取腰疼丸，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸至近干，加水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水微热使溶解，加在聚酰胺柱上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在曝光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)取腰疼丸，加盐酸乙醇溶液，加热回流，滤过，溶液浓缩至近干，加水加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝，拌匀，干燥，装入层析柱中，依次用水、甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取牛膝对照药材，加盐酸乙醇溶液，同法制成对照药材溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，对照药材及对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，薄层色谱法，该方法包括对补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷、齐墩果酸的鉴别，鉴别方法如下： (1)取腰疼丸3g，剪碎，加乙酸乙酯30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材0.3g，加乙酸乙酯10ml，同法制成对照材料溶液；再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯(15：4)为展开剂，展开2次，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点； (2)取腰疼丸6g，剪碎，加甲醇40ml，虽热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，加水25ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液60ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，加在聚酰胺柱(60-100目，3g内径2cm，用水预洗，)上，用80％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水(13：7：2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在曝光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)取本品18g，剪碎，加盐酸乙醇溶液(1→10)80ml，加热回流1小时，滤过，溶液浓缩至近干，加水40ml加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取3次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝(100-200目)3g，拌匀，干燥，装入层析柱(内径为0.9cm)中，依次用水、20％甲醇各30ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇(20：1)40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取牛膝对照药材0.5g，加盐酸乙醇溶液((1→10)40ml，同法制成对照药材溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl，对照药材及对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20：5：8：0.1)为展开剂，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，含量测定方法，用高效液相色谱法测定补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，含量测定方法，包括以下步骤： (1)对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成混合溶液，即得； (2)供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (3)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；色谱条件：采用C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，含量测定方法，包括以下步骤： (1)对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μl的混合溶液，即得； (2)供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (3)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；色谱条件：采用DIKMA，C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(30：70)为流动相；等度洗脱，流速为1.0ml/min,柱温：25℃，检测波长为246nm，理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
所属类别：	发明专利