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原文传递一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法

专利名称：	一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种基于发光材料Ru@MOF‑5为基底，构建用于检测降钙素原(PCT)的双电位比率型免疫传感器的制备方法，本发明属于新型功能材料与生物传感技术领域。具体是以孔隙率高、稳定性好的金属‑有机骨架复合物(MOF)材料MOF‑5负载Ru(bpy)32+合成新型发光材料Ru@MOF‑5作为传感器基底，此发光材料具有稳定高效的ECL输出，当PBS缓冲溶液中存在K2S2O8时，发光材料Ru@MOF‑5分别在阴极(‑1.5 V）和阳极(1.5 V)产生双信号，此外将复合材料AgNCs‑Sem‑AuNPs作为二抗标记物，用于增强基底的阴极信号，降低阳极信号，以此构建的比率型电致化学发光免疫传感器灵敏特异检测PCT。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	曹伟;东雪;李璇;赵冠辉;苗俊聪;房靖龙;赵磊;魏琴
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910793158.1
公开号：	CN110441296A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	赵凤
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，并在-0.2 ~ 0.6 V电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；（2）将8 μL，1 ~ 5 mg/mL Ru@MOF-5复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；（3）将8 μL，1 ~ 2 μg/mL PCT抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；（4）将3 μL，质量分数为1 ~ 2% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA，室温下干燥；（5）将8 μL，0.00005 ~ 100 ng/mL一系列不同浓度的PCT抗原标准溶液滴加于电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗原，室温下干燥；（6）将8 μL，2 ~ 6 mg/mL AgNCs-Sem-AuNPs复合物溶液滴加于电极上，室温下干燥后，用PBS清洗，除去多余二抗，室温下干燥。 2.如权利1所述的一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其所述的Ru@MOF-5材料的制备步骤如下： (1) MOF-5的制备将1 ~ 3 mmol Zn(NO3)2·6H2O与1 ~ 3 mmol对苯二甲酸(H2BDC)溶解于200 ~ 300mmol 的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌使其溶解，后将7 ~ 9 mmol三乙胺(TEA)加入混合溶液中，连续搅拌2 ~ 4 h，离心洗涤数次，将获得的白色沉淀放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到MOF-5； (2) Ru@MOF-5的制备称取100 ~ 200 mg的MOF-5溶解于DMF中，加入20 ~ 40 mg三(2,2'-联吡啶)二氯化钌，70 ˚C油浴加热12 h，后通过离心洗涤收集沉淀，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥24 h，得到Ru@MOF-5。 3.如权利1所述的一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其所述的AgNCs-Sem-AuNPs材料的制备步骤如下： (1) AgNCs的制备将0.15 ~ 0.18 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用20 ~ 25 mL乙二醇(EG)溶解，然后将3 ~ 5mL的AgNO3(1 mM，溶解于EG中)，和2 ~ 5 mL的FeCl3(0.6 mM，溶解于EG中)依次加入PVP溶液中，然后将混合物倒入50 mL的高压釜中，140 ˚C反应1 h，离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，得到AgNCs； (2) AuNPs的制备首先将100 mL质量分数为0.01 ~ 0.03%的氯金酸(HAuCl4) 130 ˚C油浴加热至沸腾，然后将2 ~ 3 mL质量分数为1 ~ 3%的柠檬酸钠在搅拌条件下逐滴加入到上述溶液中，溶液颜色由淡黄色变为红棕色，即为AuNPs，冷却至室温后避光保存以备使用； (3) AgNCs-Sem-AuNPs的制备在搅拌下将200 ~ 300 μL氨基脲(Sem, 10 mM)溶液加入到上述合成的300 ~ 500 μLAuNCs溶液(1 mg/mL)中，搅拌12 h以获得AgNCs-Sem，用去离子水洗涤两次后，收集沉淀并分散在去离子水中，然后，将200 ~ 400 μL制备的AuNPs溶液(1 mg/mL)加入AgNCs-Sem溶液中，搅拌12 h，然后离心洗涤数次，放置于60 ˚C真空干燥箱中干燥12 h，获得AgNCs-Sem-AuNPs。 4.如权利1所述的一种基于Ru@MOF-5双电位比率型电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，用于PCT的检测，检测步骤如下：（1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为800 V，循环伏安扫描电位范围为-1.5 ~ 1.5V，扫描速率为0.1 V/s；（2）在10 mL、 pH 6.0 ~ 8.5的含浓度为50 mmol/L ~ 100 mmol/L K2S2O8的PBS缓冲溶液中通过电化学发光方法，检测对不同浓度的PCT标准溶液产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；（3）将待测PCT样品溶液代替PCT标准溶液进行测定。
所属类别：	发明专利