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原文传递一种伏立康唑中微量基因毒性杂质检测方法

专利名称：	一种伏立康唑中微量基因毒性杂质检测方法
摘要：	本发明公开了一种伏立康唑中基因毒性杂质检测方法。其包括下述步骤：用联苯‑4‑硫酚对待测样品进行衍生化处理后，采用高效液相色谱法进行检测该基因毒性杂质即可；待测样品为伏立康唑原料药；基因毒性杂质为(R/S)‑4‑(1‑溴代乙基)‑5‑氟‑6‑氯‑嘧啶。该方法不仅能够实现伏立康唑及相关基因毒性杂质的有效分离，还能实现微含量的定量检测，从而有效控制原料药中基因毒性杂质的含量，保障用药安全。本发明的检测方法采用常用试剂，操作简便、分离度好、灵敏度高。采用普通高效液相色谱即可实现检测，不需购买和联用其他仪器，操作方便，检测成本低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉朗来科技发展有限公司
发明人：	向杰;刘学威;韦彦斌;唐红伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910865742.3
公开号：	CN110441460A
代理机构：	上海弼兴律师事务所
代理人：	王卫彬;刘奉丽
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430075湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋(研发区C2-2)
主权项：	1.一种伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，用联苯-4-硫酚对待测样品进行衍生化处理后，采用高效液相色谱法检测所述待测样品中的基因毒性杂质；所述待测样品为伏立康唑原料药；所述基因毒性杂质为含有溴代烷基官能团的基因毒性杂质。 2.如权利要求1所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述含有溴代烷基官能团的基因毒性杂质为(R/S)-4-(1-溴代乙基)-5-氟-6-氯-嘧啶；和/或，所述衍生化处理包括下述步骤：将所述联苯-4-硫酚和所述伏立康唑原料药溶解于溶剂即可；优选按下述步骤进行：将所述伏立康唑原料药、碱和所述联苯-4-硫酚溶解于溶剂中，即可获得供试品溶液。 3.如权利要求2所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述碱包括有机碱和/或无机碱；所述无机碱包括碳酸钾和/或碳酸钠；所述有机碱包括三乙胺、二乙胺、甲胺和乙胺中的一种或多种；和/或，所述供试品溶液中，所述联苯-4-硫酚与所述伏立康唑原料药的质量比为1：(300～2000)。 4.如权利要求3所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述碱为有机碱；所述有机碱优选为三乙胺；和/或，所述供试品溶液中，所述联苯-4-硫酚与所述伏立康唑原料药的质量比1：(600～1500)，优选为1：(1000～1500)，进一步优选1：1200。 5.如权利要求2所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中，所述伏立康唑原料药的浓度为25～35mg/mL，优选为30mg/mL；和/或，所述供试品溶液中，所述联苯-4-硫酚的浓度为20～30μg/mL，优选25μg/mL；和/或，所述供试品溶液中的溶剂为乙腈。 6.如权利要求1所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；和/或，所述高效液相色谱法中，采用的检测波长为250～310nm，优选为265～269nm，更优选267nm；和/或，所述高效液相色谱法中，进样量为10-25μL，优选20μL；和/或，所述高效液相色谱法中，柱温为35～45℃，优选38～42℃，更优选40℃；和/或，所述高效液相色谱法中，进样流速为0.8～1.21mL/min，优选为0.9～1.1mL/min，更优选1mL/min；和/或，所述高效液相色谱法中，使用梯度洗脱的方法，流动相A为含酸的水溶液，流动相B为乙腈。 7.如权利要求6所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述流动相A为含甲酸或乙酸的水溶液，优选甲酸；更优选含0.09-0.11％的酸的水溶液，进一步优选为含0.1％的甲酸水溶液，上述百分比为酸与水溶液的体积百分比；和/或，所述梯度洗脱的过程中，采用的初始混合液中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(75：25)～(85：15)，优选为80：20。 8.如权利要求6所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，梯度洗脱的过程中，采用如下洗脱梯度：时间min 流动相A％流动相B％ 0 80 20 10～25 20 80 25～33 10 90 33～35 10 90 35～40 80 20 40 80 20 上述百分比为体积比。 9.如权利要求1所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，所述检测基因毒性杂质的方法包括下述步骤： (1)配制含有所述基因毒性杂质的对照溶液； (2)将所述衍生化处理后的供试品溶液和所述对照溶液经所述的高效液相色谱法检测，记录所述供试品溶液中对应的所述基因毒性杂质的衍生化产物峰面积，记为A样，所述对照溶液中所述基因毒性杂质的衍生化产物峰面积A对； (3)按下述公式计算所述基因毒性杂质在伏立康唑中的含量w/w；含量＝(A样C对)/(A对C样)*100％式中： A样——为所述供试品溶液中所述基因毒性杂质的衍生化产物峰面积； A对——为所述对照溶液中所述基因毒性杂质的衍生化产物峰面积； C对——为所述对照溶液中所述基因毒性杂质的浓度； C样——为所述供试品溶液中伏立康唑原料药的浓度。 10.如权利要求9所述的伏立康唑中基因毒性杂质检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对照溶液的制备方法包括下述步骤：将所述基因毒性杂质、碱和联苯-4-硫酚溶解于溶剂中，即可；所述对照溶液中，所述碱的种类优选如权利要求3所述；所述对照溶液中的溶剂的种类优选与供试品溶液中的溶剂相同；所述对照溶液中，所述基因毒性杂质的浓度优选为60～80ng/mL，更优选75ng/mL；所述对照溶液中，所述联苯-4-硫酚的浓度优选为20～30μg/mL，更优选25μg/mL。
所属类别：	发明专利