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原文传递猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器及其制备方法

专利名称：	猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器及其制备方法
摘要：	本发明涉及猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器及其制备方法。所述猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器，是将猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体PEDV‑2C11固定于纳米金/二硫化钼/还原石墨烯复合纳米材料修饰的电极表面而构建制得。本发明通过合成纳米金/二硫化钼/还原石墨烯(AuNPs/MoS2/rGO)复合材料来制备免疫传感器，该传感器制备过程更加简便，同时通过事先将纳米金与二硫化钼/还原石墨烯构建复合材料，可维持纳米金在复合材料中的含量保持稳定，同时由于复合纳米材料中可能增加了吸附的的纳米金从而有效地增大了抗体在电极表面的固定量，可提高免疫传感器检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	扬州大学
发明人：	金文杰;杨功俊;秦爱建;赵振鹏;李晓彤;张晓蕾;王沁怡;王倩倩
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910788083.8
公开号：	CN110456051A
代理机构：	南京知识律师事务所
代理人：	卢亚丽
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	225009江苏省扬州市大学南路88号
主权项：	1.一种猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器，其特征在于，是将猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体PEDV-2C11固定于纳米金/二硫化钼/还原石墨烯复合纳米材料修饰的电极表面而构建制得。 2.权利要求1所述猪流行性腹泻病毒无标记的阻抗型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)金胶的制备：制备金纳米粒子溶液； (2)纳米金/二硫化钼/还原石墨烯复合材料的合成首先，合成二硫化钼/还原石墨烯：在10mL去离子水中加入0.08g Na2MO4·2H2O和6mg氧化石墨烯，超声分散10min；加入0.126g硫脲溶解，将所得混合物超声处理30min后转移到10mL聚四氟乙烯内衬的不锈钢高压反应釜中；将高压釜放入烘箱加热至200℃并保持24h，冷却至室温；以6000rpm/min的速度离心5min收集所得黑色沉淀物，用水和乙醇洗涤数次，然后在60℃下干燥。在反应过程中，氧化石墨烯被转化为还原的氧化石墨烯；随后，将10mgMoS2/rGO添加到10mL已制备好的金纳米溶液中，在室温下振荡12h，所得AuNPs/MoS2/rGO复合材料用水洗涤后6000rpm/min离心5min得到沉淀物，在60℃下干燥收集最终产物； (3)免疫传感器的制备用直径为0.15μm的Al2O3抛光液将GCE表面打磨成镜面后，用超纯水进行超声清洗并在氮气流中干燥，待电极完全干燥后，将5μL AuNPs/MoS2/rGO水溶液滴到裸GCE表面，室温晾干；将修饰好的电极浸入200μL 0.15mg/mL单克隆抗体PEDV-2C11的磷酸盐缓冲溶液中，置于4℃下12h，电极取出后放入10mg/mL的牛血清蛋白中1h以封闭非特异性位点；用二次水冲洗除去表面多余的牛血清蛋白，制备好的电极浸入pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中，置于4℃保存备用；将固定了抗体的电极浸入不同浓度猪流行性腹泻病毒的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，置于37.5℃水浴中反应140min后，取出分别用二次水和磷酸缓冲溶液冲洗干净，然后进行电化学阻抗检测。 3.用权利要求1所述阻抗型免疫传感器检测猪流行性腹泻病毒的方法，包括以下步骤： (1)建立阻抗的相对变化率％△Rct与猪流行性腹泻病毒浓度的关系：测定阻抗型免疫传感器的起始阻抗值Rct(BSA)，以及阻抗型免疫传感器分别与不同浓度的猪流行性腹泻病毒标准溶液进行免疫反应后阻抗140min； (2)按照步骤(1)的方法和条件将阻抗型免疫传感器与待测物溶液进行免疫反应，测定阻抗值，计算得到抗体与猪流行性腹泻病毒反应后引起阻抗的相对变化率％△Rct； (3)根据步骤(1)确定的阻抗的相对变化率％△Rct与猪流行性腹泻病毒浓度的关系，确定出待测物溶液中猪流行性腹泻病毒含量。
所属类别：	发明专利