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1.一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法,其特征在于,该检测方法步骤为: (1)检测波长的测定 取CS标准品溶液适量,以去离子水为参比溶液,用1cm光程长的比色皿扫描测定190-1100nm的紫外可见吸收曲线,得到化合物的紫外可见光谱; (2)色谱条件 色谱柱:安捷伦Zorbax SAX;流动相A为水溶液,流动相B为2mol·L-的氯化钠溶液,梯度洗脱;检测波长为232nm;流速为1.0ml·min-;柱温:40℃; (3)酶解条件 根据称样量及酶活性加入过量的CS ABC酶解液200μL,CS,ABC酶解液反应温度为30-40℃,反应时间2-5h,在进样前先将样品液在100℃加热使其凝固,经离心除去杂质,再经0.45μm滤膜滤过,可得澄清的供试品溶液; (4) 对照品储备液及工作液的制备 适量取硫酸软骨素对照品干燥,精密称取200 mg于小烧杯中,加入二乙睛,振荡使其分散均匀,再加入纯水,超声波溶解,转移至100 mL容量瓶,加水定容,制成质量浓度为2 mg/mL的储备液储于冰箱中;精密量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加水至刻度并摇匀,在进行高效液相色谱仪测定前用0.45μm滤膜过滤。 2.根据权利要求1所述一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法,其特征在于,该检测方法步骤(2)色谱条件:色谱柱:安捷伦Zorbax SAX ( 250mm×4.6 mm,5μm);流动相A为水溶液(pH 3.5)流动相B为2mol•L-的氯化钠溶液(pH 3.5),梯度洗脱;检测波长为232nm;流速为1.0ml•min-;柱温:40℃。 3.根据权利要求1所述一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法,其特征在于,该检测方法步骤(3)酶解条件ABC酶解液反应温度为37℃,反应时间3 h,样品液加热时间为3min。 4.根据权利要求1所述一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法,其特征在于,该检测方法步骤(4) 对照品储备液及工作液的制备:适量取硫酸软骨素对照品于105℃下干燥4h,精密称取200 mg于小烧杯中,加入10.0 mL二乙睛,振荡使其分散均匀,再加入纯水,超声波溶解,转移至100 mL,容量瓶,加水定容,制成质量浓度为2 mg/mL的储备液储于4℃冰箱中;精密量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL,分别置于10 mL,容量瓶中,加水至刻度并摇匀,在进行高效液相色谱仪测定前用0.45μm滤膜过滤。 |