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一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法
| 专利名称： | 一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法 |
| 摘要： | 本发明提供了一种快速鉴别硫酸软骨素原料的来源的HPLC法,鉴别过程不需要样品预处理、直接对样品分析,简单易行,方法稳定,结果准确,极大缩短了鉴别时间；（2）本方法能够较好地实现对鲨鱼、牛、鸡或者猪来源的硫酸软骨素溯源问题。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 湖南;43 |
| 申请人： | 汉寿康运医药科技有限公司 |
| 发明人： | 何雄;肖利辉;贺莲;张静;刘爱霞;刘娟 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2017-10-24T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-04-30T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201710998771.8 |
| 公开号： | CN109696490A |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 415900 湖南省常德市汉寿高新技术产业园区竹子碑居委会孵化大楼内 |
| 主权项： | 1.一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法，其特征在于，该检测方法步骤为： (1)检测波长的测定 取CS标准品溶液适量,以去离子水为参比溶液,用1cm光程长的比色皿扫描测定190-1100nm的紫外可见吸收曲线，得到化合物的紫外可见光谱； (2)色谱条件 色谱柱:安捷伦Zorbax SAX；流动相A为水溶液，流动相B为2mol·L-的氯化钠溶液，梯度洗脱；检测波长为232nm；流速为1.0ml·min-；柱温：40℃； (3)酶解条件 根据称样量及酶活性加入过量的CS ABC酶解液200μL，CS,ABC酶解液反应温度为30-40℃，反应时间2-5h，在进样前先将样品液在100℃加热使其凝固，经离心除去杂质，再经0.45μm滤膜滤过，可得澄清的供试品溶液； (4) 对照品储备液及工作液的制备 适量取硫酸软骨素对照品干燥，精密称取200 mg于小烧杯中，加入二乙睛，振荡使其分散均匀，再加入纯水，超声波溶解，转移至100 mL容量瓶，加水定容，制成质量浓度为2 mg/mL的储备液储于冰箱中；精密量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加水至刻度并摇匀，在进行高效液相色谱仪测定前用0.45μm滤膜过滤。 2.根据权利要求1所述一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法，其特征在于，该检测方法步骤（2）色谱条件：色谱柱:安捷伦Zorbax SAX ( 250mm×4.6 mm,5μm)；流动相A为水溶液(pH 3.5)流动相B为2mol•L-的氯化钠溶液(pH 3.5)，梯度洗脱；检测波长为232nm；流速为1.0ml•min-；柱温：40℃。 3.根据权利要求1所述一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法，其特征在于，该检测方法步骤(3)酶解条件ABC酶解液反应温度为37℃，反应时间3 h，样品液加热时间为3min。 4.根据权利要求1所述一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法，其特征在于，该检测方法步骤(4) 对照品储备液及工作液的制备：适量取硫酸软骨素对照品于105℃下干燥4h，精密称取200 mg于小烧杯中，加入10.0 mL二乙睛，振荡使其分散均匀，再加入纯水，超声波溶解，转移至100 mL,容量瓶，加水定容，制成质量浓度为2 mg/mL的储备液储于4℃冰箱中；精密量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL，分别置于10 mL,容量瓶中，加水至刻度并摇匀，在进行高效液相色谱仪测定前用0.45μm滤膜过滤。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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