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原文传递一种三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法

专利名称：	一种三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法
摘要：	本发明公开了一种三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备：取三白草样品粉末，加入80％甲醇，经回流提取后，用80％甲醇补足减失的质量，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；步骤2，指纹图谱的建立：采用高效液相色谱仪，对供试品溶液进行检测，建立供试品溶液的指纹图谱。本发明灵敏地对样品进行定性和定量分析，较好地反映共有峰的相似性，检测分离度较好，实验结果可靠，重复性和稳定性良好，具有较高的精密度，大大缩短了检测时间。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院)
发明人：	毕晓黎;徐峻;顾琼;江洁怡;蒋富强;胥爱丽;陈伟韬;李养学
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910220647.8
公开号：	CN109828055A
代理机构：	东莞市兴邦知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	梁首强;冯思婷
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510095 广东省广州市越秀区恒福路60号
主权项：	1.一种三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该建立方法包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备：取三白草样品粉末，加入80％甲醇，经回流提取后，用80％甲醇补足减失的质量，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；步骤2，指纹图谱的建立：采用高效液相色谱仪，对供试品溶液进行检测，建立供试品溶液的指纹图谱。 2.根据权利要求1所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤1中，三白草样品粉末与甲醇的比例为1g三白草样品粉末：50mL 80％甲醇。 3.根据权利要求1所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤1中，回流提取时间为30min，且采用0.45μm微孔滤膜过滤。 4.根据权利要求1-3任一所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤2中，色谱条件为：采用Waters XbridgeTMC18色谱柱，色谱柱规格为4.6mmx250mm、5μm，以甲醇为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱，柱温为25℃，流速为1.0mL·min-1，检测波长为238nm，进样量为10μL。 5.根据权利要求4所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，梯度洗脱条件：0～21min，14％A；21～37min，14～39％A；37～42min，40～52％A；42～96min，52～80％A；96～105min，80～95％A。 6.根据权利要求1-5任一所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该建立方法还包括步骤3，指纹图谱的相似度评价：将供试品溶液的指纹图谱与标准指纹图谱进行比对，计算相似度。 7.根据权利要求6所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，标准指纹图谱的建立是以金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、马兜铃内酰胺AⅡ、1’表-三白草酮、(-)-三白草醇甲基醚、三白草酮、三白草醇I、里卡灵A、4-O-去甲基马钠萨亭B、马钠萨亭B、里卡灵B的混合物为对照品溶液测得。 8.根据权利要求7所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，对照品溶液为金丝桃苷35.46μg/mL、芦丁21.54μg/mL、槲皮苷41.36μg/mL、马兜铃内酰胺AⅡ45.67μg/mL、1’表-三白草酮49.28μg/mL、(-)-三白草醇甲基醚67.58μg/mL、三白草酮179.04μg/mL、三白草醇I 52.80μg/mL、里卡灵A 80.67μg/mL、4-O-去甲基马钠萨亭B 80.48μg/mL、马钠萨亭B 122.08μg/mL、里卡灵B 67.04μg/mL的混合对照品甲醇溶液。 9.根据权利要求6所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，供试品溶液的指纹图谱共有模式具有13个共有特征峰，各共有特征峰对应的化学成分分别是1号峰：芦丁，2号峰：金丝桃苷，3号峰：槲皮苷，6号峰：马兜铃内酰胺AⅡ，10号峰：1’表-三白草酮，13号峰：(-)-三白草醇甲基醚，14号峰：三白草酮，15号峰：三白草醇I，17号峰：里卡灵A，18号峰：4-O-去甲基马钠萨亭B，19号峰：马钠萨亭B，20号峰：里卡灵B。 10.根据权利要求9所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，以3号峰槲皮苷色谱峰的保留时间和峰面积为参照，得出如下其他峰的相对保留时间和相对峰面积： 1号峰：相对保留时间为0.83-0.849，相对峰面积为0.022-1.002； 2号峰：相对保留时间为0.859-0.866，相对峰面积为0.583-1.58； 6号峰：相对保留时间为1.807-1.844，相对峰面积为0.123-0.653； 10号峰：相对保留时间为2.292-2.339，相对峰面积为0.114-0.404； 13号峰：相对保留时间为2.456-2.542，相对峰面积为0.059-0.356； 14号峰：相对保留时间为2.527-2.582，相对峰面积为2.389-8.322； 15号峰：相对保留时间为2.624-2.682，相对峰面积为0.137-0.705； 17号峰：相对保留时间为2.729-2.79，相对峰面积为0.19-2.268； 18号峰：相对保留时间为2.84-2.903，相对峰面积为0.201-0.747； 19号峰：相对保留时间为3.003-3.072，相对峰面积为0.352-1.155； 20号峰：相对保留时间为3.13-3.204，相对峰面积为0.07-1.032。
所属类别：	发明专利