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原文传递一种快速检测甲壳素中蛋白质含量的方法

专利名称：	一种快速检测甲壳素中蛋白质含量的方法
摘要：	本发明提供了一种快速检测甲壳素中蛋白质的方法，属于蛋白质检测技术领域。检测方法包括如下步骤：（1）称取样品，加入0.5mol/L NaOH溶液，水浴后抽滤，得到收集液1；（2）收集残渣加入0.3mol/L NaOH溶液，水浴后抽滤，得到收集液2；（3）收集残渣加入0.2mol/L NaOH溶液，水浴后抽滤，得到收集液3；（4）将三次收集液分别吸取1mL于10mL样品比色管中，另分别吸取浓度为100μg/mL的蛋白质标准溶液0 mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.0mL于6支10mL标准比色管中，向6支标准比色管加入1%NaCl溶液1mL、0.9 mL、0.8 mL、0.6 mL、0.2 mL、0 mL，使其体积为1.0mL,于标准比色管和样品比色管中加入考马斯亮蓝G250溶液5.0 mL,混匀，静置10min后于595nm处测定其吸光度。（5）通过计算公式，计算得到总的蛋白质含量。
专利类型：	发明专利
申请人：	日照健安检测技术服务有限公司
发明人：	郑萌萌;郭晓华;张廷翠;张永勤;刘祥燕;成艳;彭桂芝
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010057219.0
公开号：	CN111060468A
代理机构：	济南智圆行方专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	任道光
分类号：	G01N21/31;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/31
申请人地址：	276800 山东省日照市东港区滨州路以北、枣庄路以西
主权项：	1.一种快速检测甲壳素中蛋白质含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）样品前处理 A.称取甲壳素样品，加入0.5mol/L NaOH溶液，80℃水浴1h； B.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液1转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用（1+5）Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测； C.将残渣1收集至锥形瓶中，加入0.3mol/L NaOH溶液，80℃水浴1h； D.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液2转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用（1+7）Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测； E.将残渣2收集至锥形瓶中，加入0.2mol/L NaOH溶液，70℃水浴1h； F.冷却后，使用抽滤瓶过滤残渣，将收集液3转移到100mL容量瓶中，加入一滴甲基红指示剂，用（1+7）Hcl溶液调节PH值至中性，用纯水定容后待测；（2）样品检测 A.将收集液1，收集液2和收集液3分别吸取1mL于10mL样品比色管中； B.分别吸取100μg/mL 的蛋白质标准溶液0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.0mL于6支10mL标准比色管中； C.向6支标准比色管中加入1% Nacl溶液1mL、0.9 mL、0.8 mL、0.6 mL、0.2 mL、0 mL，使其体积为1mL； D.于6支标准比色管和3支样品比色管中加入5mL考马斯亮蓝G250溶液，混匀，静置10min后于595nm处测定其吸光度； E.通过计算公式，计算3支样品的蛋白质含量，合并3次结果得到总的蛋白质含量。 2.根据权利要求1所述的一种快速检测甲壳素中蛋白质含量的方法，其特征在于，所述计算公式为：公式中： X---试样中蛋白质含量（%）； C ---从标准曲线上得到蛋白质溶液浓度，单位为微克（μg）； V1---样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）； V2--样品溶液待测体积位为毫升（mL）； m ---样品溶液所代表的试样的质量，单位为微克（μg）。 3.根据权利要求1所述的一种快速检测甲壳素中蛋白质含量的方法，其特征在于，所述甲壳素样品质量与所述0.5mol/L NaOH溶液用量的比值为2g：50mL；所述甲壳素样品质量与所述0.3mol/L NaOH溶液用量的比值为2g:50mL；所述甲壳素样品质量与所述0.2mol/L NaOH溶液用量的比值为2g:50mL。 4.根据权利要求1所述的一种快速检测甲壳素中蛋白质含量的方法，所述考马斯亮蓝G250溶液的配置方法为100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇溶液中，加入180g柠檬酸，20g硼酸，溶解后定容至1L。
所属类别：	发明专利