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一种高效液相质谱法测定大鼠血浆中布洛芬的浓度的方法
| 专利名称： | 一种高效液相质谱法测定大鼠血浆中布洛芬的浓度的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种高效液相质谱法测定大鼠血浆中布洛芬的浓度的方法，包括以下步骤：制备校正标示样、质控样品、空白样品、QC0样品、ULOQ without IS样品、Reagent样品、基质效应样品和回收率样品。利用所述校正标示样和所述质控样品制得标准曲线，将待测样品根据所述标准曲线得到待测样品中的布洛芬浓度。利用所述空白样品、所述QC0样品、所述ULOQ without IS样品和Reagent样品用来相互校正，减少干扰性。利用所述基质效应样品和所述回收率样品来评价该方法的基质效应和回收率。应用HPLC‑MS/MS(高效液相质谱)法同时测量大鼠血浆中布洛芬的浓度，该测试方法的准确度高，基质效应的影响小，干扰性小，回收率高。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 安领生物医药(苏州)有限公司 |
| 发明人： | 王樱桃;李健明 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 1900-01-20T00:00:00+0805 |
| 发布日期： | 1900-01-20T15:00:00+0805 |
| 申请号： | CN201911412913.3 |
| 公开号： | CN111157639A |
| 代理机构： | 苏州隆恒知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 周子轶 |
| 分类号： | G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72 |
| 申请人地址： | 215000 江苏省苏州市工业园区金鸡湖大道99号11栋504室 |
| 主权项： | 1.一种高效液相质谱法测定大鼠血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)在浓度范围20～2*104ng/mL内配置梯度浓度的布洛芬校正标示样；在浓度范围20～1.5*104ng/mL内配置梯度浓度的布洛芬质控样品；配置50、2*104ng/mL的内标工作液，其中内标为双氯芬酸钠； 在96孔板的孔上分别标示校正标示样、质控样品、空白样品、QC0样品、ULOQ withoutIS样品、Reagent样品、基质效应样品和回收率样品,分别取10μL的所述校正标示样、所述质控样品至对应的所述96孔板的孔中，各取10μL空白基质至所述96孔板中空白样品、QC0样品、ULOQ without IS样品和回收率样品的孔中，取10.0μL水至所述96孔板中的Reagent样品的孔中，吸取单个供体(n≥6)的10μL的空白基质放入基质效应样品孔中，取单个供体的空白基质，再吸取10μL的多个供体的混合的所述空白基质放入回收率样品孔中； (2)在所述校正标示样、所述质控样品和所述QC0样品中加入190μL的所述内标工作液，在所述空白样品、所述Reagent样品、所述ULOQ without IS样品，所述基质效应样品和所述回收率样品中加入190μL甲醇溶液； (3)封板后涡旋混匀，在10℃，4000rpm条件下离心10min； (4)对所述校正标示样、所述质控样品、所述QC0样品、所述空白样品、所述Reagent样品、所述ULOQ without IS样品，取离心后的上清液100μL至所述96孔板中，并加入200μL水溶液进行稀释；对所述基质效应样品和所述回收率样品，取离心后的上清液100μL至所述96孔板中，并加入100μLNeat溶液和100μL水溶液进行稀释。 (5)离心取上清液稀释后，密封所述96孔板，低速涡旋混匀，各个所述样品取3.0μL在高效液相质谱联用仪(HPLC-MS/MS)上进样分析。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述校正标示样的制备方法包括：取1.00mg/mL的布洛芬，并且溶解于等体积的MeOH-DMSO溶液，配置得到布洛芬储备液，将所述布洛芬储备液用甲醇-水溶液稀释成梯度浓度为400～4*105ng/mL的校正标示样品工作液，将所述校正标示样品工作液用空白基质稀释成梯度浓度为20～2*104ng/mL的所述校正标示样，所述空白基质为不含所述分析物与所述内标的大鼠血浆。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述质控样品的制备方法包括：将所述布洛芬储备液用甲醇-水溶液稀释成梯度浓度为400～3*105ng/mL的质控样品工作液，将所述质控样品工作液用所述空白基质稀释成梯度浓度为20～1.5*104ng/mL的所述质控样品。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述内标工作液的制备方法包括：取2.00mg/mL的双氯芬酸钠，并且溶解于甲醇溶液，配置得到双氯芬酸钠储备液，将所述双氯芬酸钠储备液用甲醇-水溶液稀释成所述内标工作液。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中高效液相质谱联用仪的工作条件为： (1)色谱条件为： 色谱柱：Inertstain AQ-C18 5.0μm(2.1mm x 50mm,5.0μm)； 自动进样器温度：10℃； 流动相A：H2O/AA/NH4Ac(1000/0.1/1，v/v)； 流动相B：ACN/AA(1000/0.1，v/v)； 进样器清洗液：R0:MeOH/H2O(25/75，v/v)；R3:ACN/H2O(50/50，v/v)； 洗脱方式：梯度洗脱； (2)质谱条件为： 质谱仪：AB SCIEX-4000Q TRAP-LC/MS/MS system； 离子源：ESI电喷雾电离； 离子化模式：Negative； 检测模式：MRM多反应监测； 涡旋离子喷雾温度：550℃。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括标准曲线的制作：以布洛芬比内标双氯芬酸钠的色谱峰面积比为纵坐标，以大鼠血浆中布洛芬的浓度为横坐标制作标准曲线；待测样品根据所述标准曲线计算得到所述待测样品中的布洛芬浓度。 7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述校正标示样品工作液的梯度浓度分别为4*105、3.2*105、8*104、3.2*104、3200、800、400ng/mL；所述校正标示样的梯度浓度分别为2*104、1.6*104、4*103、1.6*103、160、40、20ng/mL。 8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述质控工作液的梯度浓度分别为3*105、2*105、1.2*104、1200、400ng/mL；所述质控样品的梯度浓度分别为1.5*104、1*104、600、60、20ng/mL。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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