详情

原文传递鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法

专利名称：	鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法
摘要：	本发明提供了一种鉴定3‑丁烯基芥子油苷代谢产物4，5‑环硫戊腈的方法，该方法为：取模式植物拟南芥生态型Ler的叶片，加重蒸水，研磨后加浓度为100mmol/L的3‑丁烯基芥子油苷的标准品溶液,待酶解后，加二氯甲烷萃取得到3‑丁烯基芥子油苷代谢物的提取液，用于鉴定3‑丁烯基芥子油苷代谢产物4，5‑环硫戊腈。本发明通过高浓度的3‑丁烯基芥子油苷的标准品溶液的添加，提高3‑丁烯基芥子油苷代谢产物4，5‑环硫戊腈的含量，目标代谢产物的色谱峰显著区别于低丰度的杂质峰，在ESP酶的作用下，3‑丁烯基芥子油苷的代谢产物偏向生成4，5‑环硫戊腈，与无ESP酶的作用下的3‑丁烯基芥子油苷代谢产物的气相色谱对比，快速鉴别出3‑丁烯基芥子油苷代谢产物4，5‑环硫戊腈。
专利类型：	发明专利
申请人：	浙江省农业科学院
发明人：	赵彦婷;岳智臣;陶鹏;雷娟利;李必元
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T10:00:00+0805
申请号：	CN201911322714.3
公开号：	CN110988183A
代理机构：	西安汇恩知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张伟花
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
申请人地址：	310021 浙江省杭州市江干区石桥路198号
主权项：	1.一种鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法，其特征在于，该方法为： S1、取模式植物拟南芥生态型Ler的叶片，加入重蒸水，研磨后，得到Ler酶粗提液； S2、向S1中得到的Ler酶粗提液中加入浓度为100mmol/L的3-丁烯基芥子油苷的标准品溶液，在温度为37℃的条件下酶解0.5h～1h，得到Ler反应液；向S1中得到的Ler酶粗提液中加入重蒸水，在温度为37℃的条件下放置0.5h～1h，得到Ler反应液的对照液；所述Ler酶粗提液和3-丁烯基芥子油苷的标准品溶液的体积比与所述Ler酶粗提液和重蒸水的体积比相同； S3、向S2中得到的Ler反应液和Ler反应液的对照液中分别加入二氯甲烷a，混合均匀后静置20min，然后在转速为12000rpm、室温条件下离心10min，取上层有机相a，下层水相中再加入二氯甲烷b混合均匀后静置20min，然后在转速为12000rpm、室温条件下离心10min，取上层有机相b，合并所述有机相a和所述有机相b，分别得到3-丁烯基芥子油苷代谢物的提取液及对照液； S4、对S3中得到的3-丁烯基芥子油苷代谢物的提取液和对照液进行气相色谱检测及比较分析，鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈。 2.根据权利要求1所述的一种鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法，其特征在于，S1中所述模式植物拟南芥生态型Ler的叶片和蒸馏水的质量和体积比为0.5g:2mL。 3.根据权利要求1所述的一种鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法，其特征在于，S2中所述Ler酶粗提液和3-丁烯基芥子油苷的标准品溶液的体积比为1：0.05；所述Ler酶粗提液和重蒸水的体积比为1：0.05。 4.根据权利要求1所述的一种鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法，其特征在于，S2中所述Ler反应液和二氯甲烷a的体积比为1:1。 5.根据权利要求1所述的一种鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法，其特征在于，S2中所述下层水相和二氯甲烷b的体积比为1:1。 6.根据权利要求1所述的一种鉴定3-丁烯基芥子油苷代谢产物4，5-环硫戊腈的方法，其特征在于，S4中所述气相色谱分析的条件为：使用30m×0.25mm×0.25μm的气相色谱连接色谱柱RTX-5和FID检测器，氮气作为载气，进样口温度为200℃，进样量为1μL，无分流；在温度为35℃的条件下保持3min，然后以12℃/min的升温速率升温至96℃，再以18℃/min的升温速率升温至240℃，保持6min。
所属类别：	发明专利