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原文传递花生致敏蛋白Ara h1的表达纯化及其制备的IgE抗体检测试剂盒

专利名称：	花生致敏蛋白Ara h1的表达纯化及其制备的IgE抗体检测试剂盒
摘要：	本发明公开了一种花生致敏蛋白Ara h1的表达纯化及其制备的IgE抗体检测试剂盒。该花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体检测试剂盒包括标记有第一物质的花生致敏蛋白Ara h1，所述第一物质和第二物质为具有特异亲和性的一对物质，所述花生致敏蛋白Ara h1通过如下步骤制备：确定要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列，对所述氨基酸序列经过密码子优化，得到花生致敏蛋白Ara h1在原核细菌中的核苷酸序列，将所述核苷酸序列插入到pET28b载体中获得pET28b‑Arah1载体，将所述pET28b‑Arah1载体转化至原核表达感受态细胞中，进行表达，制得花生致敏蛋白Ara h1。本发明的IgE抗体检测试剂盒，能够快速准确地检测花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	东方伊诺(苏州)医疗科技有限公司
发明人：	徐珂;张哲蓉;陆浩;张国家
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-31T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-11T00:00:00+0800
申请号：	CN202111683002.1
公开号：	CN114167065A
代理机构：	苏州创元专利商标事务所有限公司
代理人：	李萍
分类号：	G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;C07K14/415;C12N15/70;C12N15/29;G;C;G01;C07;C12;G01N;C07K;C12N;G01N33;C07K14;C12N15;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;C07K14/415;C12N15/70;C12N15/29
申请人地址：	215000 江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A4楼408单元
主权项：	1.一种花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，包括标记有第一物质的花生致敏蛋白Ara h1，所述第一物质和第二物质为具有特异亲和性的一对物质，所述花生致敏蛋白Ara h1通过如下步骤制备：确定要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列，对所述氨基酸序列经过密码子优化，得到花生致敏蛋白Ara h1在原核细菌中的核苷酸序列，将所述核苷酸序列插入到pET28b载体中获得pET28b-Arah1载体，将所述pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态细胞中，进行表达，制得花生致敏蛋白Ara h1。 2.根据权利要求1所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述IgE抗体检测试剂盒还包括固相载体及酶标记鼠抗人IgE抗体，所述固相载体包括载体膜，所述载体膜上包被有所述第二物质。 3.根据权利要求1或2所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述第一物质和所述第二物质分别为生物素和抗生物素抗体，或为生物素和链霉亲和素；和/或，所述酶标记抗人IgE抗体为HRP标记鼠抗人IgE单克隆抗体、ALP标记鼠抗人IgE单克隆抗体或吖啶酯标记鼠抗人IgE单克隆抗体。 4.根据权利要求1所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，要表达的花生致敏蛋白Arah1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。 5.根据权利要求1所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，在所述核苷酸序列两端添加NdeI和EcoRI，同时N端融合GS Linker、6X His和凝血酶位点，C端融合Avi Tag，插入到pET28b载体中。 6.一种花生致敏蛋白Arah1的制备方法，其特征在于，确定要表达的花生致敏蛋白Arah1的氨基酸序列，对所述氨基酸序列经过密码子优化，得到花生致敏蛋白Ara h1在原核细菌中的核苷酸序列，将所述核苷酸序列插入到pET28b载体中获得pET28b-Arah1载体，将所述pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态细胞中，进行表达，制得花生致敏蛋白Ara h1。 7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列去除N端部分氨基酸序列后得到要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列；和/或，要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。 9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述核苷酸序列两端添加NdeI和EcoRI，同时N端融合GS Linker、6X His和凝血酶位点，C端融合Avi Tag，插入到pET28b载体中获得pET28b-Arah1载体，将所述pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态BL21(DE3)中制得菌液，加入到培养基中，加入诱导物诱导表达。 10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，具体通过如下步骤制得花生致敏蛋白Ara h1：将pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态BL21(DE3)中制得pET28b-Arah1(DE3)菌液，取菌液加入到含卡那霉素的培养基中，37℃、200rpm培养过夜，次日按比例接种于含卡那霉素的培养基中，培养至吸光值OD600为0.6左右时，加入IPTG至浓度为1mmol/L，进行诱导表达，离心，收集上清，进行纯化；纯化上清用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白表达量。
所属类别：	发明专利