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原文传递一种胶原蛋白变性温度的测定方法

专利名称：	一种胶原蛋白变性温度的测定方法
摘要：	本发明公开了一种胶原蛋白变性温度的测定方法，在胶原蛋白样品中加入醋酸溶液于低温下溶解，使用天狼星红对不同变性程度的胶原蛋白样品进行染色，将生成的沉淀溶于碱液后于550nm处测量吸光值并绘制拟合曲线，通过拟合方程计算即可得出胶原蛋白变性温度；通过本方法来判断胶原蛋白的变性温度，结果重现性好，特异性强，操作简单，可用于胶原蛋白产品品质的检测。与其他检测技术相比，该方法具备操作简单、设备需求小的特点，非常适合作为胶原蛋白变性温度的常规检测手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	淮海工学院
发明人：	段蕊;张俊杰;陈鑫;张博妍
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910411065.8
公开号：	CN110095421A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	何文豪
分类号：	G01N21/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	222005 江苏省连云港市海州区苍梧路59号
主权项：	1.一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：在胶原蛋白样品中加入醋酸溶液于低温下溶解，使用天狼星红对不同变性程度的胶原蛋白样品进行染色，将生成的沉淀溶于碱液后于550nm处测量吸光值并绘制拟合曲线，通过拟合方程计算即可得出胶原蛋白变性温度。 2.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：所述方法具体如下：（1）制备储备液：取待测胶原蛋白原料样品，加入预冷的0.1-1M醋酸溶液于0-10℃下溶解，并装于A瓶中；（2）分装样品：从A瓶中取等量溶解后样品置于离心管B、C1、C2、C3、C4、……Cn中；（3）变性处理：B管始终处于0-10℃，该低温状态使得胶原蛋白三螺旋结构不被热力破坏； C1、C2、C3、C4、……Cn管分别放入高温水浴处理2-30min后取出，并迅速置于冰水浴中；（4）染色：步骤（3）中得到的B、C1、C2、C3、C4、……Cn离心管中加入17-600μg/mL的天狼星红染液0.1-5mL，染色1-60min；（5）离心：等待染色完成后，3000-21000r/min离心1-60min，弃去上清液，得到天狼星红-胶原蛋白复合沉淀；（6）洗涤：再次于得到的天狼星红-胶原蛋白复合沉淀中加入预冷的0.1-1M醋酸溶液0.1-5mL，充分振荡；（7）离心：3000-21000r/min离心1-60min，弃去上清液，收集复合沉淀；（8）溶解：于收集到的复合沉淀中加入0.1-1M NaOH 0.1-5mL，待沉淀完全溶解后于520-560nm处测定吸光值，并作散点图；（9）计算变性温度：其中将吸光值未下降部分称为天然态，该部分吸光值取均值记为OD0；将吸光值线性下降部分称为过渡态，将该部分数据点进行线性拟合得到拟合方程；胶原蛋白变性温度定义为：当吸光值为胶原蛋白天然态吸光值平均数的50-90%时所对应的温度；得出胶原蛋白样品变性温度（Td）的具体计算方法。 3.根据权利要求2所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：步骤（1）中胶原蛋白样品包括但不限于鱼皮、鱼鳞、猪皮、牛皮、牛筋腱来源的胶原蛋白。 4.根据权利要求2所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：步骤（4）中选用的天狼星红染液包括但不限于单纯以天狼星红为溶质，酸液为溶剂的染液，还包括其他以天狼星红为原料配制的染料。 5.根据权利要求2所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法, 其特征在于：所述步骤（3）设定高温状态的温度及维持时间应根据处理样品不同作具体调整，高温温度为10-70℃。 6.根据权利要求2所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：步骤（6）中所使用的酸液包括但不限于醋酸；步骤（8）中所使用的碱液包括但不限于NaOH。 7.根据权利要求2所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：所述步骤（9）中的拟合方程包括但不限于线性拟合方程、多项式拟合方程以及指数拟合方程。 8.根据权利要求2或7所述的一种胶原蛋白变性温度的测定方法，其特征在于：所述步骤（9）将该部分数据点进行拟合得到的拟合方程包括但不限于如下方程： OD=a×T+c （OD：吸光值，T：温度℃）胶原蛋白变性温度定义包括但不限于当吸光值为胶原蛋白天然态吸光值平均数的90%时所对应的温度；胶原蛋白样品变性温度（Td）的具体计算方法包括但不限于如下计算式： Td=（90%×OD0-c）÷a。
所属类别：	发明专利