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原文传递检测牛乳中A2β-酪蛋白含量的方法

专利名称：	检测牛乳中A2β-酪蛋白含量的方法
摘要：	本发明公开了检测牛乳中A2β‑酪蛋白含量的方法。该方法包括：将牛乳进行冷却离心处理，以便得到待测储备液；利用样品稀释液对所述待测储备液进行稀释处理，以便得到稀释后的储备液，其中，所述样品稀释液含有5‑15mmol/L磷酸二氢钠浓度、100‑150mmol/L三羟甲基氨基甲烷、6‑10mol/L尿素、30‑50mmol/L乙二胺四乙酸二钠和0.05‑0.15％二硫苏糖醇，且所述样品稀释液的pH值为7.5‑8.6；以及利用毛细管电泳法对所述稀释后的储备液进行检测，以便确定所述牛乳中A2β‑酪蛋白含量。该方法能对A2β‑酪蛋白进行定量检测，并且，特异性好、准确度高、检测时间短、操作简单、重复性好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	内蒙古;15
申请人：	内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司
发明人：	李周勇;刘宇;陈云
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201810300669.0
公开号：	CN110346443A
代理机构：	北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	赵天月
分类号：	G01N27/447(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	011500 内蒙古自治区呼和浩特市和林格尔盛乐经济园区
主权项：	1.一种检测牛乳中A2β-酪蛋白含量的方法，其特征在于，包括：将牛乳进行冷却离心处理，以便得到待测储备液；利用样品稀释液对所述待测储备液进行稀释处理，以便得到稀释后的储备液，其中，所述样品稀释液含有5-15mmol/L磷酸二氢钠浓度、100-150mmol/L三羟甲基氨基甲烷、6-10mol/L尿素、30-50mmol/L乙二胺四乙酸二钠和0.05-0.15％二硫苏糖醇，且所述样品稀释液的pH值为7.5-8.6；以及利用毛细管电泳法对所述稀释后的储备液进行检测，以便确定所述牛乳中A2β-酪蛋白含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低温离心处理包括：将所述牛乳在0-10摄氏度条件下静置0.5-2小时，以便得到冷却的牛乳；以及将所述冷却的牛乳在4000-8000r/min条件下离心10-30min，以便得到所述待测储备液。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品稀释液含有8-10mmol/L磷酸二氢钠浓度、110-130mmol/L三羟甲基氨基甲烷、7-9mol/L尿素、40-50mmol/L乙二胺四乙酸二钠和0.08-0.12％二硫苏糖醇，且所述样品稀释液的pH值为7.8-8.2。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品稀释液与所述待测储备液按体积比1-6：1进行所述稀释处理，任选地，所述稀释后的储备液的pH值为6.5-8.5，温度为30-50摄氏度。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛细管电泳法是采用溶胶-凝胶毛细管进行的。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，制备所述溶胶-凝胶毛细管的方法包括：将预处理的毛细管分别利用水、酸溶液和碱溶液进行清洗处理，以便得到清洗后的毛细管；将所述清洗后的毛细管在溶胶溶液中浸洗10-50分钟后，再静置10-30分钟，以便得到浸洗后的毛细管；将所述浸洗后的毛细管利用丙酮进行第一冲洗处理，以便得到第一冲洗后的毛细管；将所述第一冲洗后的毛细管进行干燥处理，以便得到干燥后的毛细管；以及将所述干燥后的毛细管进行第二冲洗处理，以便得到所述溶胶-凝胶毛细管，任选地，所述干燥处理是以0.5-2℃/min的速度升温至80-150℃后，烘干0.5-2小时。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述溶胶溶液包括： 450-950μLγ-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷；以及 50-250μL PH值为2.5-4.5的乙酸溶液。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛细管电泳法采用的电泳缓冲液包括： 0.1-0.2mol/L磷酸； 10-30mmol/L磷酸二氢钠； 6-10mol/L尿素； 0.05-0.15％羟乙基甲基纤维素，且pH值为2.0-5.0，优选地，所述电泳缓冲液包括： 0.15mol/L磷酸； 20mmol/L磷酸二氢钠； 6-10mol/L尿素； 0.05-0.15％羟乙基甲基纤维素，且pH值为2.0-5.0。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：利用所述样品稀释液对A2β-酪蛋白标准品进行梯度稀释，以便得到不同浓度的A2β-酪蛋白标准品溶液；利用毛细管电泳法对所述不同浓度的A2β-酪蛋白标准品溶液进行检测，以便得到A2β-酪蛋白的浓度-峰面积关系曲线；以及基于所述A2β-酪蛋白的浓度-峰面积关系曲线，以便确定所述牛乳中A2β-酪蛋白含量。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛细管电泳法的检测条件包括：检测波长为150-350纳米，优选地，为214nm；检测温度为15-35℃；采用压力进样，进样压力为0.2-1psi，优选地，为0.5psi，进样时间为5-20s；工作电压为20-30kv；检测频率为4-16Hz。
所属类别：	发明专利