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原文传递质谱检测乳样品A1和A2β酪蛋白的方法

专利名称：	质谱检测乳样品A1和A2β酪蛋白的方法
摘要：	本发明公开一种质谱检测乳样品A1β酪蛋白及A2β酪蛋白的方法，该方法利用A1β酪蛋白、A2β酪蛋白的标准特征多肽组对乳样品进行检测，其中所述乳制品包括牛乳、羊乳，所述A1β酪蛋白、A2β酪蛋白的标准特征多肽序列分别如SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2所示。利用本发明的方法能够准确地检测出乳品中是否含有A1β‑酪蛋白和A2β酪蛋白，并能对其二者含量进行相对定量。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京毅新博创生物科技有限公司
发明人：	付书辉;吕倩;何昆;陈莲莲;马庆伟;向华
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911424263.4
公开号：	CN111077215A
分类号：	G01N27/62;G01N33/68;G;G01;G01N;G01N27;G01N33;G01N27/62;G01N33/68
申请人地址：	102206 北京市昌平区中关村生命科学园28号博达高科技大厦一层
主权项：	1.一种MALDI-TOF-MS检测乳样品A1β酪蛋白及A2β酪蛋白的方法： (1)待检测的乳样品在缓冲液中依次经还原反应、烷基化反应、胰蛋白酶酶解处理后终止反应，得到乳品前处理液； (2)将乳品处理液与质谱基质涂加在质谱专用靶板上； (3)采用MALDI-TOF-MS对所述样品进行检测，并将指纹图谱结果进行标准化处理，并收集数据； (4)对所得数据进行质控处理，分析A1β-酪蛋白特征多肽峰值：单电荷5360m/z(5‰)或双电荷2680m/z(5‰)，或分析A2β-酪蛋白特征多肽峰值：单电荷5320m/z(5‰)或双电荷2660m/z(5‰)； (5)根据检测结果，利用飞行时间质谱A2β-酪蛋白检测软件计算A1β-酪蛋白及A2β-酪蛋白的相对含量。 2.权利要求1所述的方法，其中所述步骤(1)的还原反应是在碳酸氢钠缓冲体系中加入还原剂，使其终浓度不低于0.1mol/L，50-70℃恒温反应10～60min，该步骤可水解二硫键破坏蛋白的空间结构，其中还原剂为二硫苏糖醇(DTT)。 3.权利要求1所述的方法，其中所述步骤(1)的烷基化反应是在上述产物中加入烷基化试剂，使其终浓度不低于0.1mol/L，20～30℃避光恒温反应10～60min，该步骤可使蛋白完全变性，其中烷基化试剂为碘代乙酰胺(IAA)。 4.权利要求1所述的方法，其中所述步骤(1)的胰蛋白酶酶解处理是在上述产物中加入胰蛋白酶溶液，使其终浓度不低于0.1g/L，并在37℃恒温反应至少30min，该步骤应用胰蛋白酶只作用于精氨酸(R)和赖氨酸(K)的专一性的特点，把β-酪蛋白酶切成分子量小于10000Da的小分子肽段，完全酶解后加入终止试剂甲酸溶液使胰蛋白酶变性，反应终止。 5.权利要求1-4任一所述的方法，其中步骤(2)中，使用SA基质，其成分为每毫升基质溶液含芥子酸25mg，乙腈500μl，三氟乙酸1μl，纯水500μl。 6.权利要求5所述的方法，其中步骤(3)中，MALDI-TOF-MS的检测条件为：调制方式：线性；数据收集范围：m/z 1000～20000；谱图采集数量：每个样品点收集50张谱图，每张谱图用激光轰击10次；激光频率：30Hz；最佳脉冲提取：5340Da。 7.权利要求6所述的方法，其中步骤(4)中，所述软件的功能包括：去背景、降噪、出峰位置校正、出峰强度规划及A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的相对含量计算。 8.权利要求7所述的方法，其中所述样品为生鲜牛乳及其它动物乳液或乳制品(如羊乳)。 9.权利要求8所述的方法，其中在优选的实施方案中，所述乳制品为婴幼儿配方粉、脱脂乳粉、全脂乳粉、高温杀菌奶、巴氏杀菌奶、发酵型酸奶等动物乳制品。
所属类别：	发明专利