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原文传递一种荧光-稳定同位素双模态对三硝基甲苯的检测方法

专利名称：	一种荧光-稳定同位素双模态对三硝基甲苯的检测方法
摘要：	本发明的目的是提供一种对三硝基甲苯（TNT）的“荧光‑稳定同位素”双模态检测方法。该分析方法包括聚胸腺嘧啶‑核酸适配体探针（AptTNT‑T30）和荧光检测和稳定同位素检测双模态检测。本发明的原理是：TNT核酸适配体（AptTNT）序列可以和目标TNT分子特异性结合进行端基保护，避免核酸外切酶切割，可以使5’端的聚胸腺嘧啶序列（T30）作为模板原位合成铜纳米粒子。合成的铜纳米粒子可以进行双模态的检测：在荧光检测模式下可进行快速荧光检测;铜纳米粒子硝酸消解后，在稳定同位素检测模式下可用电感耦合等离子体质谱仪进行高灵敏稳定定量分析，可以分别满足TNT的实地快速检测和高灵敏准确检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川大学
发明人：	吕弋;胡建煜;刘睿
专利状态：	有效
申请日期：	2018-10-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201811264443.6
公开号：	CN109765203A
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	610065 四川省成都市武侯区一环路南一段24号
主权项：	1.一种可以检测三硝基甲苯（TNT）的分析方法，其特征在于： a.所述分析方法包括聚胸腺嘧啶-核酸适配体探针（AptTNT-PolyT）和荧光检测和稳定同位素检测双模态检测； b.所述分析方法AptTNT-PolyT探针序列为5’-TTT TTT TTT TTT (… …) TTT TTTTTT TTT CTC GGT TGT GGT GTT AGT TGG TAC TGC GCC TCC GTC GTC CTG TCA CTC TGCTGC AGC GCG CGA GCC ATA CAC TAT ACA CCT TAA AAT ATA GTT GCC TAG G-3’；所述分析方法AptTNT-PolyT探针序列中，5’端TTT TTT TTT TTT (… …) TTT TTTTTT TTT序列为聚胸腺嘧啶核酸序列，可以在抗坏血酸和硫酸铜的作用下快速原位合成铜纳米粒子； c.所述分析方法AptTNT-T30探针序列中，3’端CTC GGT TGT GGT GTT AGT TGG TACTGC GCC TCC GTC GTC CTG TCA CTC TGC TGC AGC GCG CGA GCC ATA CAC TAT ACA CCTTAA AAT ATA GTT GCC TAG G序列为核酸适配体序列，可以在PBS溶液中和待测TNT分子特异性结合生成三明治结构，形成端基保护，不被ExoⅠ酶切割。 2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于： a.该分析方法包括：a.荧光光谱传感分析，即TNT和AptTNT-PolyT探针反应形成端基保护后，可以不被ExoⅠ酶切割，在抗坏血酸和硫酸铜作用下快速原位合成铜纳米粒子，利用铜纳米粒子特异性荧光光谱，记录下不同浓度的发射光信号，采用线性回归分析，即可对待测TNT样品进行荧光定量检测；b.稳定同位素检测，同样方法合成的铜纳米粒子，在硝酸消解后转换成大量铜离子，利用电感耦合等离子体质谱仪对铜元素稳定同位素进行高灵敏定量，记录下不同浓度的同位素质谱强度信号，采用线性回归分析，即可对TNT样品进行高灵敏稳定检测； b.所述分析方法中TNT进样量浓度范围为1-100nM（荧光检测模式）和0.25-20nM（稳定同位素检测模式）； c.所属分析方法中TNT与AptTNT-PolyT反应所用缓冲溶液为PBS溶液(8.1mM Na2HPO3,1.9mM NaH2PO3,145mM NaCl, pH=7.2-7.4)，时间为60-90min,温度为20-25℃； d.所属分析方法中AptTNT-PolyT与ExoⅠ反应所用缓冲溶液为NEBuffer 3，时间为90-120min，温度为37℃； e.所属分析方法中AptTNT-PolyT与抗坏血酸和硫酸铜的反应缓冲溶液为MOPS(10 mMMOPS, 2mM MgCl2, 150mM NaCl, pH=7.6)，温度为20-25℃，时间为3-5min； f.所属分析方法中在荧光检测模式和稳定同位素检测模式下对TNT的检出限可达到0.17ppb(ng mL-1)和0.30ppt(pg mL-1)。 3.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于：在荧光检测模式下利用荧光光谱仪进行检测，在360nm波长的光激发下，CuNPs发射出660nm的红色荧光；在稳定同位素检测模式下利用ICPMS进行检测，以63Cu同位素作为检测对象进行高灵敏定量分析。
所属类别：	发明专利