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原文传递一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒

专利名称：	一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒
摘要：	本发明公开了一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒，具有特异性高、能实现精准结构鉴定等优点。该试剂盒包括碱水解液、水解反应淬灭剂、提取液、P‑B反应液，DEEA反应剂，盐类清洗剂，复溶液，其利用的是质谱技术分析脂肪酸及其双键的位置，提高食品检测质量。本发明具有灵敏度高，结构鉴定精准等优点，并能避免对应自配试剂引起的操作误差，同时可提升操作的简便性和结构的稳定性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	中国农业科学院油料作物研究所
发明人：	魏芳;徐淑玲;吕昕;董绪燕;陈洪;黄凤洪
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910137747.4
公开号：	CN109828047A
代理机构：	湖北武汉永嘉专利代理有限公司
代理人：	张秋燕
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430062 湖北省武汉市武昌区徐东二路2号
主权项：	1.一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒，其特征在于包括碱水解液、水解反应淬灭剂、提取液、P-B反应液、DEEA反应剂、盐类清洗剂、复溶液，具体组成成分分别如下： ①碱水解液：0.3-0.4mol/L氢氧化钾溶液； ②水解反应淬灭剂：0.4-0.6mol/L盐酸； ③提取液：正己烷； ④P-B反应液：丙酮/水/乙醇的混合溶液，三者体积比为(550-600)：(350-400)：(40-60)； ⑤DEEA反应剂：N，N-二乙基乙二胺溶液：15-25μmol/mL；2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物溶液：15-25μmol/mL；三乙胺溶液：15-25μmol/mL； ⑥盐类清洗剂：体积分数85-95％的甲酸水溶液； ⑦复溶液1：氯仿； ⑧复溶液2：乙腈。 2.一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒，其特征在于包括碱水解液、水解反应淬灭剂、提取液、P-B反应液，DEEA反应剂，盐类清洗剂，复溶液，具体组成成分分别如下： ①碱水解液：0.3-0.4mol/L氢氧化钾溶液，100-300μL； ②水解反应淬灭剂：0.4-0.6mol/L盐酸，400-600μL； ③提取液：正己烷，5-15mL； ④P-B反应液：丙酮/水/乙醇的混合溶液，三者体积比为(550-600)：(350-400)：(40-60)，0.5-1.5mL； ⑤DEEA反应剂：N，N-二乙基乙二胺溶液：15-25μmol/mL，40-60μL；2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物溶液：15-25μmol/mL，40-60μL；三乙胺溶液：15-25μmol/mL，20-40μL； ⑥盐类清洗剂：体积分数85-95％的甲酸水溶液，2-10mL； ⑦复溶液1：氯仿，0.5-2mL； ⑧复溶液2：乙腈，0.5-2mL。 3.根据权利要求1或2所述的一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒，其特征在于所述的氢氧化钾溶液以体积分数90-95％的乙醇水溶液为溶剂配置。 4.根据权利要求1或2所述的一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒，其特征在于所述的DEEA反应剂中三种溶液均以色谱级乙腈为溶剂配置。 5.根据权利要求2所述的一种油脂中不饱和脂肪酸精准结构鉴定的试剂盒，其特征在于所述试剂盒使用时，油脂待测样品的用量为3～10mg，油脂待测样品预先用氯仿/甲醇混合溶液稀释至0.3-1mg/mL。 6.权利要求2所述试剂盒的使用方法，其特征在于具体使用方法如下： 1)称取1～6mg油脂，用氯仿/甲醇混合稀释后，氮吹干；然后加入碱水解液超声分散后，75-85℃水浴1.5-2.5小时，加入水解淬灭剂淬灭反应，然后用提取液正己烷提取脂肪酸，氮吹干； 2)不饱和脂肪酸的光化学衍生化反应将步骤1)所得氮吹干的脂肪酸提取物，用P-B反应液复溶，在254nm低压汞灯下反应55-65min，得到脂肪酸P-B反应产物； 3)将步骤2)脂肪酸P-B反应产物的N，N-二乙基乙二胺衍生化反应：将步骤2)脂肪酸P-B反应产物加入DEEA反应剂混匀后，35-45℃超声4-6min进行衍生化反应，衍生化反应后用氮气吹干；该步骤中氮气吹干的产物用色谱用复溶液1复溶后，加入盐类清除剂，涡旋后弃上层溶剂，再氮气吹干，并用色谱用复溶液2复溶，然后经过有机相滤膜过滤； 4)脂肪酸的定性方法：步骤3)中所得产物进行质谱分析，得到谱图和谱峰数据，确定对应各脂肪酸衍生物的准分子离子峰；脂肪酸衍生产物中每个双键会产生两个特征性碎片离子，即称为一对诊断离子，1对诊断离子的分子式分别存在以下规律，C(x-n)H(2(x-n-a)+4)O2N+,C(x-n+3)H(2(x-n-a)+10)ON+，其中X为总碳数，n为采取从甲基端计数方式第一个双键的位置，a为采取从甲基端计数方式该双键的序号；根据诊断离子可判断出双键的位置，同时对于存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸，其所含双键的位置不同，其分别对应的衍生产物在质谱碰撞诱导解离中分别产生不同m/z的诊断离子，确定存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸中所含双键的位置，从而对待测样品中的游离脂肪酸实现定性分析。
所属类别：	发明专利