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原文传递一种骨康制剂的特征图谱构建方法及其特征图谱

专利名称：	一种骨康制剂的特征图谱构建方法及其特征图谱
摘要：	本发明涉及药物检测技术领域，具体是一种骨康制剂的特征图谱构建方法及其特征图谱。本发明对供试品、对照品分别制备后，建立适合的色谱条件：以0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，建立特定的流动相系统，并按特定程序进行梯度洗脱，采用HPLC法进行测定，最终获得适用于骨康制剂质量检测的特征图谱。本发明获得了36个共有峰，并指认了其中8‑18个特征峰，并对所指认的化学成分进行了来源归属，可以较为全面、客观、准确的检测和评价骨康胶囊及其他剂型的质量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州维康子帆药业股份有限公司
发明人：	贺赫赫;曾庆梅;陈玉和;龙彦泽;沈万燕;李勇军;周安琪;胡中润;韦艳萍
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-21T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202211153013.3
公开号：	CN115616107A
代理机构：	贵州派腾知识产权代理有限公司
代理人：	龙远宁
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/86
申请人地址：	550000 贵州省贵阳市修文县扎佐医药工业园区
主权项：	1.一种骨康制剂的特征图谱构建方法，所述骨康制剂由芭蕉根、酢浆草、续断、补骨脂和三七共5味药材制成，其特征在于，所述特征图谱是对制剂中续断、补骨脂、三七、酢浆草药材，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱的HPLC法特征图谱构建过程；其中，梯度洗脱条件如下： 2.如权利要求1所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于，特征图谱构建方法步骤如下： (1)检测条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；理论板数按异补骨脂素峰计算应不低于100000；所述梯度洗脱条件为： (2)参照物溶液的制备分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、补骨脂苷、异补骨脂苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re、补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷Ⅵ、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、补骨脂酚和马钱苷对照品，加70％甲醇制成每1ml各含0.25mg的混合对照品溶液，作为对照品参照物溶液； (3)供试品溶液的制备取骨康制剂内容物，至于容器中，加70％甲醇后密塞静置，然后超声处理1-3次，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得； (4)测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各1μL，注入高效液相色谱仪，测定； (5)特征图谱的建立：进行多批次供试品测定，记录色谱图，分别考察各供试品溶液的色谱图特征峰，从骨康制剂供试品溶液的共有峰中选取各药材中具有代表性的化合物峰为特征峰，并进行色谱峰的化学成分指认及归属确定，得到骨康胶囊特征图谱。 3.如权利要求2所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于，特征图谱构建方法步骤如下： (1)检测条件——色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm；以0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为45℃；检测波长为203nm；理论板数按异补骨脂素峰计算应不低于100000；所述梯度洗脱条件为： (2)参照物溶液的制备分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、补骨脂苷、异补骨脂苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re、补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷Ⅵ、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、补骨脂酚和马钱苷对照品，加70％甲醇制成每1ml各含0.25mg的混合对照品溶液，作为对照品参照物溶液； (3)供试品溶液的制备取骨康制剂内容物，至于容器中，加70％甲醇后密塞静置10-15小时，所述骨康制剂内容物和70％甲醇的质量体积比为1：12.5；然后取静置后的供试品溶液，在功率200W、频率40kHz的条件下，超声处理25-40分钟，静置40-80分钟，再超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤，即得； (4)测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各1μL，注入高效液相色谱仪，测定； (5)特征图谱的建立：进行多批次供试品测定，记录色谱图，分别考察各供试品溶液的色谱图特征峰，从骨康制剂供试品溶液的共有峰中选取各药材中具有代表性的化合物峰为特征峰，并进行色谱峰的化学成分指认及归属确定，得到骨康胶囊特征图谱。 4.如权利要求1-3任一项所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述骨康制剂可以是按照国家药品标准、标准号为：WS-10464(ZD-0464)-2005-2012Z)制备得到的骨康胶囊，也可以是按照如下方法制成的片剂、颗粒、口服液或其他口服剂型：芭蕉根600g、酢浆草400g、补骨脂600g、续断300g、三七150g，以上五味，取芭蕉根30g和三七分别粉碎成细粉，剩余芭蕉根与其余补骨脂、酢浆草、续断三味加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.31～1.35的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，混匀，然后加入药学上可接受的口服剂型所需辅料，制成片剂、颗粒、口服液或其他口服剂型。 5.如权利要求1-3任一项所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述步骤(3)供试品溶液的制备中，还包括离心步骤，是将超声后的续滤液置离心管中，以12000转/分钟离心5-20分钟。 6.如权利要求1-3任一项所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于，在步骤(5)特征图谱的建立时，还包括阴性供试品溶液的制备、单味药材供试品溶液的制备步骤，以便进行色谱峰的指认及归属确定：阴性供试品溶液的制备：按骨康制剂制备方法，分别制备缺芭蕉根、酢浆草、补骨脂、续断和缺三七的阴性对照样品，然后按照步骤(3)方法制备各味药材阴性样品溶液；单味药材供试品溶液的制备：按骨康制剂制备方法，分别制备芭蕉根、酢浆草、补骨脂、续断和三七各单味药样品，然后按照步骤(3)方法制备单味药材样品溶液。 7.如权利要求1-3任一项所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述步骤(5)特征图谱的建立，是在分别考察多批次供试品溶液的色谱图特征峰后，共获得36个共有峰，从该36个共有峰中拟定8-18个特征峰，并进行色谱峰的化学成分指认及归属确定，得到骨康制剂特征图谱。 8.如权利要求7所述的骨康制剂的特征图谱构建方法，其特征在于：所述步骤(5)中特征峰的拟定，是从该36个共有峰中选取各药材中具有代表性的化合物16个峰和酢浆草中1个峰为特征峰，共拟定了17个特征峰；所述色谱峰的化学成分指认及归属确定，是对骨康供试品溶液、单独各味药供试品溶液、缺各味药的阴性对照溶液及70％甲醇的空白溶液与对照品参照物溶液中化学对照品的色谱行为及光谱进行比较，指认了其中18个峰，峰1：新绿原酸；峰2：绿原酸；峰3：隐绿原酸；峰A：马钱苷；峰4：补骨脂苷；峰5：异补骨脂苷；峰7：异绿原酸B；峰8：异绿原酸A；峰9：异绿原酸C；峰10：三七皂苷R1；峰11：人参皂苷Rg1和人参皂苷Re；峰12：补骨脂素；峰13(S)：异补骨脂素；峰14：川续断皂苷Ⅵ；峰15：人参皂苷Rb1；峰16：人参皂苷Rd；峰17：补骨脂酚；所述峰1-峰3、峰A、峰7-峰9、峰14共8个特征峰来源于续断；峰4、峰5、峰12、峰13(S)和峰17共5个峰来源于补骨脂；峰10、峰11、峰15、峰16共4个峰来源于三七。 9.利用权利要求1-8任一项所述的骨康制剂的特征图谱构建方法构建得到的特征图谱，其特征在于，如图2所示。 10.权利要求1-8任一项所述的骨康制剂的特征图谱构建方法或权利要求9所述的骨康制剂特征图谱，在骨康胶囊产品的鉴定和质量控制中的应用。