详情

原文传递一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用

专利名称：	一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用
摘要：	本发明公开了一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其具有6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰的峰面积最大；以该峰面积最大的所述特征峰为参照峰，6个所述特征峰的相对保留时间tg分别为：0.376，0.416，0.548，0.685，0.837，1.000，RSD％<0.3％。本发明还公开了该图谱的构建方法和应用。本发明建立的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，通过对比特征峰的有无，可有效的进行刺猬紫檀真伪鉴别。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	汕头出入境检验检疫局检验检疫技术中心
发明人：	魏建华;梁希扬;魏霜;刘晓莹;吴剑光
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910244406.7
公开号：	CN110068636A
代理机构：	上海旭诚知识产权代理有限公司
代理人：	郑立
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	515031 广东省汕头市大华路11号主楼
主权项：	1.一种刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，具有6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰的峰面积最大；以该峰面积最大的所述特征峰为参照峰，6个所述特征峰的相对保留时间tg分别为：0.376，0.416，0.548，0.685，0.837，1.000，RSD％<0.3％。 2.如权利要求1所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，6个所述特征峰的相对峰面积分别为：0.0336，0.0547，0.0090，0.0222，0.0039，1.000，RSD<1.5。 3.一种如权利要求1所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、供试品溶液的制备：称取刺猬紫檀心材部分木屑，加入甲醇、高纯水，震摇，超声提取，滤纸过滤，微孔滤膜过滤，得到所述供试品溶液；步骤二、HPLC检测：将所述步骤一得到的供试品溶液进行HPLC检测，色谱条件为：Agilent Eclipse XDB-C18，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；以水为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0～20min，流动相B的体积百分含量由8％提高至23％，流动相A的体积百分含量由92％降低至77％；从20～33min,流动相B的体积百分含量为23％，流动相A的体积百分含量为77％；从33～43min，流动相B的体积百分含量由23％提高至30％，流动相A的体积百分含量由77％降低至70％；从43～53min,流动相B的体积百分含量30％，流动相A的体积百分含量为70％；从53～69min，流动相B的体积百分含量由30％提高至38％，流动相A的体积百分含量由70％降低至62％；从69～76min，流动相B的体积百分含量38％，流动相A的体积百分含量为62％；从76～91min，流动相B的体积百分含量由38％提高至49％，流动相A的体积百分含量由62％降低至51％；从91～92min，流动相B的体积百分含量49％，流动相A的体积百分含量为51％；从92～95min，流动相B的体积百分含量由49％降低至8％，流动相A的体积百分含量由51％提高至92％；从95～103min，流动相B的体积百分含量8％，流动相A的体积百分含量为92％；检测波长为290nm；柱温30℃；流速1.0mL/min；得到HPLC检测结果。 4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤一具体为：称取刺猬紫檀心材部分木屑0.2g，置于50mL离心管中，加入5mL甲醇、5mL高纯水，震摇5min，超声提取5min，滤纸过滤，再以0.2μm的微孔滤膜过滤，得到所述供试品溶液。 5.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，还包括步骤三、分析比较多批来源不同的刺猬紫檀的HPLC检测结果，得到由其共有特征峰构成的所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱。 6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述步骤三具体为：将所述多批来源不同的刺猬紫檀的HPLC检测结果导入国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，选取时间窗宽度为0.2min，以中位数生成对照谱图，经过多点校正后自动匹配，生成刺猬紫檀指纹图谱共有模式，并计算所述多批来源不同的刺猬紫檀的HPLC检测结果与该刺猬紫檀指纹图谱共有模式的相似度，使得所述相似度在0.984以上。 7.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，还包括步骤四、所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱的精密度试验、重现性试验及稳定性试验。 8.如权利要求1所述的刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱在鉴别刺猬紫檀真伪方面的应用。 9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱与所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱对比，根据其共有特征峰的有无，进行刺猬紫檀真伪鉴别。 10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱的获得除色谱柱外，采用了如权利要求3或4所述的方法；当所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱采用Agilent Eclipse XDB-C18，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm时，将所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱通过相似度分析软件与所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱进行多点校正和共有特征峰匹配的方式分析，对于相似度≥0.9，且与共有特征峰对应的保留时间31.862min、35.231min、46.415min、58.021min、63.243min、84.681min，分别相比相对标准偏差RSD％<0.5％，鉴定结果为刺猬紫檀，否则不是刺猬紫檀；当所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱采用与Agilent Eclipse XDB-C18不同的其他C18色谱柱时，需要通过相对保留时间和相对峰面积作为指标进行判断是否有与所述刺猬紫檀HPLC标准指纹图谱相同的共有特征峰，即将所述疑似刺猬紫檀的样品的HPLC指纹图谱，以其峰面积最大的峰，作为参照峰，以其对应的保留时间计算得出该样品指纹图谱相对保留时间，通过如果其含有标准指纹图谱中所有6个峰，且未知样品相对保留时间与标准指纹图谱的相对保留时间标准偏差小于2％，且未知样品相对峰面积与标准指纹图谱的相对峰面积标准偏差小于1，鉴定结果为刺猬紫檀，否则不是刺猬紫檀。
所属类别：	发明专利